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Documento BOE-A-1981-23562

Orden de 17 de septiembre de 1981 por la que se establecen métodos oficiales de análisis de aceites y grasas, aguas, carnes y productos cárnicos, fertilizantes, productos fitosanitarios, leche y productos lácteos, piensos y sus primeras materias, productos orgánicos fertilizantes, plantas, suelos, productos derivados de la uva y similares y toma de muestras.

Publicado en:
«BOE» núm. 246, de 14 de octubre de 1981, páginas 24003 a 24034 (32 págs.)
Sección:
I. Disposiciones generales
Departamento:
Presidencia del Gobierno
Referencia:
BOE-A-1981-23562
Permalink ELI:
https://www.boe.es/eli/es/o/1981/09/17/(3)

TEXTO ORIGINAL

DE CONFORMIDAD CON LO ESTABLECIDO EN LAS ORDENES MINISTERIALES DE 30 DE NOVIEMBRE DE 1976 (<BOLETIN OFICIAL DEL ESTADO> DE 4 DE ENERO DE 1977), 31 DE ENERO DE 1977 (<BOLETIN OFICIAL DEL ESTADO>DE 14 A 27 DE JULIO) Y 31 DE JULIO DE 1979 (<BOLETIN OFICIAL DEL ESTADO> DE 20 Y 30 DE AGOSTO), POR LAS QUE SE DECLARABAN COMO OFICIALES DIVERSOS METODOS DE ANALISIS SE HA CONTINUADO ENSAYANDO Y PONIENDO A PUNTO NUEVOS METODOS, NO SOLO DE LAS MATERIAS, COMPRENDIDAS EN LAS CITADAS ORDENES, SINO DE OTRAS NUEVAS DONDE EXISTE NECESIDAD URGENTE DE DISPONER DE METODOS DE ANALISIS PARA EL CONTROL DE DETERMINADOS PARAMETROS ANALITICOS.

EN SU VIRTUD, Y A PROPUESTA DE LOS MINISTROS DE AGRICULTURA Y PESCA, DE HACIENDA, DE ADMINISTRACION TERRITORIAL, DE DEFENSA, DE TRABAJO, SANIDAD Y SEGURIDAD SOCIAL, DE INDUSTRIA Y ENERGIA, DE ECONOMIA Y COMERCIO, DE EDUCACION Y CIENCIA, DE OBRAS PUBLICAS Y URBANISMO, ESTA PRESIDENCIA DEL GOBIERNO DISPONE:

PRIMERO.-SE APRUEBAN COMO OFICIALES LOS METODOS DE ANALISIS DE ACEITES Y GRASAS, AGUAS , CARNE Y PRODUCTOS CARNICOS, FERTILIZANTES, PRODUCTOS FITOSANITARIOS , LECHE Y PRODUCTOS LACTEOS, PIENSOS Y SUS PRIMERAS MATERIAS, PRODUCTOS ORGANICOS FERTIZIZANTES PLANTAS, SUELOS, PRODUCTOS DERIVADOS DE LA UVA Y SIMILARES Y TOMA DE MUESTRAS QUE SE CITAN RESPECTIVAMENTE EN LOS ANEXOS I AL XII.

SEGUNDO.-CUANDO NO EXISTAN METODOS OFICIALES PARA DETERMINADOS ANALISIS, Y HASTA QUE SEAN ESTUDIADOS POR EL GRUPO DE TRABAJO CORRESPONDIENTE, PODRAN SER UTILIZADOS LOS ADOPTADOS POR ORGANISMOS NACIONALES O INTERNACIONALES DE RECONOCIDA SOLVENCIA.

TERCERO.-QUEDAN DEROGADAS LAS DISPOSICIONES DE IGUAL O INFERIOR RANGO QUE SE OPONGAN A LA PRESENTE ORDEN.

CUARTO.-LA PRESENTE DISPOSICION ENTRARA EN VIGOR A LOS TREINTA DIAS DE SU PUBLICACION EN EL <BOLETIN OFICIAL DEL ESTADO>.

MADRID, 17 DE SEPTIEMBRE DE 1981.-RODRIGUEZ INCIARTE.

ANEXO I.-ACEITES Y GRASAS

35.-PRUEBA DE VIZERN

35.1.-PRINCIPIO

INSOLUBILIZACION DE ALCOHOLES GRASOS SUPERIORES A PARTIR DEL INSAPONIFICABLE DE ACEITES PROCEDENTES DE ACEITUNA QUE POR SU CUANTIA Y EN DETERMINADAS CONDICIONES PUEDEN PRECIPITAR

35.2.-MATERIAL Y APARATOS

35.2.1.-MATRAZ DE FONDO PLANO, DE 250 ML. ADAPTABLE A REFRIGERANTE DE REFLUJO

35.2.2 REFRIGERANTE DE REFLUJO

35.2.3 EMBUDOS DE SEPARACION DE 500 ML

35.2.4 BAÑO DE ARENA

35.2.5 MATRAZ ERLENMEYER DE 100 ML., CON BOCA ESMERILADA , PROVISTA DE REFRIGERANTE DE REFLUJO DE AIRE, CONSTITUIDO POR UN TUBO DE 80 A 100 CENTIMETROS DE LONGITUD APROXIMADAMENTE

35.2.6 TUBO DE ENSAYO CON GRUESO DE PARED DE 1,5 MM. Y DIMENSIONES APROXIMADAS DE 160 MM DE ALTURA Y 30 MM DE DIAMETRO INTERIOR, PROVISTO DE TAPON DE CAUCHO DE SILICONA, LLEVANDO EN EL CENTRO UN TERMOMETRO GRADUADO EN GRADOS COMPRENDIENDO LA ESCALA LA GAMA DE 20 GRADOS C - 85 GRADOS C, MANTENIENDOSE HOMOGENEA LA TEMPERATURA EN TODO EL RECINTO INTERIOR UTILIZABLE

35.2.7. ESTUFA DE CULTIVOS, DE CAPACIDAD ADECUADA, REGULABLE A UNA TEMPERATURA DE 23 GRADOS C +- 0,5 GRADOS C

35.2.8 EVAPORADOR ROTATORIO CON VACIO

35.2.9 BAÑO DE AGUA REGULABLE DE 26 GRADOS C +-0,5 GRADOS C

35.2.10.-PIPETA DE 10 ML.

35.2.11.-VASOS DE 150 ML DE FORMA ALTA

35.3.-REACTIVOS

35.3.1.-SOLUCION DE HIDROXIDO POTASICO 2N, EN ETANOL DE 96 GRADOS G.L. EXENTO DE ALDEHIDOS

35.3.2.-ETANOL DE 50 GRADOS G.L.

35.3.3.-AGUA DESTILADA

35.3.4 SULFATO SODICO ANHIDRO

35.3.5.-DISOLUCION INDICADORA DE FENOLFTALEINA. DISOLVER 1 GRAMO DE FENOLFTALEINA EN 100 ML DE ETANOL DE 96 GRADOS G.L.

35.3.6.-ETANOL DE 96 GRADOS G.L., EXENTO DE ALDEHIDOS

35.3.7.-HEXANO

35.3.8.-ETANOL DE 85 GRADOS G.L. DILUIR 885 ML DE ETANOL DE 96 GRADOS G.L. HASTA 1.000 ML CON AGUA DESTILADA. AJUSTAR EXACTAMENTE. (FORMULA OMITIDA )

35.4.-PROCEDIMIENTO

PESAR CON PRECISION DE 0,01 G. DE ACEITE EN UN MATRAZ DE 250 ML Y AÑADIR 50 ML DE LA DISOLUCION ALCOHOLICA DE HIDROXIDO POTASICO 2N, COLOCAR EL REFIRGERANTE Y HERVIR DURANTE UNA HORA. TRANSCURRIDO DICHO TIEMPO, RETIRAR EL MATRAZ DEL BAÑO Y ESPERAR UNOS MINUTOS HASTA QUE BAJE SU TEMPERATURA, RETIRAR EL REFRIGERANTE Y VERTER ELCONTENIDO DEL MATRAZ EN EL EMBUDO DE SEPARACION DE 500 ML, ENJUAGAR EL MATRAZ CON 50 ML DE AGUA DESTILADA EN PEQUEÑAS PORCIONES Y A CONTINUACION PROCEDER ANALOGAMENTE CON 50 ML DE HEXANO, RECOGIENDOSE TODO EN EL EMBUDO DE SEPARACION. AGITAR ENERGICAMENTE DURANTE UN MINUTO. DEJAR REPASAR Y UNA VEZ QUE LAS FASES ESTEN COMPLETAMENTE SEPARADAS, TRANSVASAR LA SOLUCION HIDROALCOHOLICA AL MATRAZ DE SAPONIFICACION Y LA DISOLUCION DE HEXANO A UN SEGUNDO EMBUDO DE SEPARACION. EXTRAER HEXANICO CON EL ANTERIOR. REALIZAR UNA TERCERA EXTRACCION CON OTROS 50 ML DE HEXANO Y REUNIR CON LOS EXTRACTOS ANTERIORES

EN EL CASO DE QUE SE FORMEN EMULSIONES, AÑADIR UNAS GOTAS DE ETANOL ABSOLUTO PARA ELIMINARLAS

LAVAR LOS EXTRACTOS TRES VECES SEGUIDAS CON PORCIONES DE 50 ML DE ETANOL DE 50 GRADOS AGITANDO DURANTE TREINTA SEGUNDOS , HASTA QUE EN EL ULTIMO LAVADO NO SE APRECIE COLORACION ROSA AL ADICIONARLE DOS O TRES GOTAS DE DISOLUCION INDICADORA DE FENOLFTALEINA. EN CASO CONTRARIO, CONTINUAR CON LOS LAVADOS

PASAR LA DISOLUCION EN HEXANO DEL INSAPONIFICABLE A UN MATRAZ DE 250 ML CON TAPON ESMERILADO, ENJUAGANDOSE DOS VECES EL EMBUDO DE EXTRACCION CON 5 ML DE HEXANO CADA VEZ. AGREGAR AL MATRAZ UNOS GRAMOS DE SULFATO SODICO SECO, AGITANDO Y DEJANDO EN REPOSO UNAS DOS HORAS CON EL TAPON AJUSTADO

A CONTINUACION, Y EN PORCIONES SUCESIVAS, FILTRAR LA SOLUCION HEXANICA A TRAVES DEL PAPEL DEL FILTRO SECO, RECOGIENDO LA SOLUCION FILTRADA EN UN MATRAZ DE 100 ML, EVAPORAR EL DISOLVENTE EN UN EVAPORADOR ROTATORIO CON VACIO, PUDIENDOSE CALENTAR UNA TEMPERATURA QUE NO EXCEDA DE 40 GRADOS C

TERMINADA LA EVAPORACION DE LA TOTALIDAD DEL DISOLVENTE, SE AGREGAN A MATRAZ 10 ML DE ETANOL DE 85 GRADOS MEDIDOS CON PIPETA, COLOCAR EL REFRIGERANTE E INTRODUCIR EN UN BAÑO DE AGUA REGULADO A UNA TEMPERATURA DE 80 GRADOS C +- 5 GRADOS C, EN EL QUE SE MANTIENE, AGITANTO DE VEZ EN CUANDO, HASTA CONSEGUIR LA FUSION DEL PRODUCTO O SU DISOLUCION TOTAL, PARA LO QUE SON SUFICIENTES, NORMALMENTE, UNOS 2 O 3 MINUTOS DE PERMANENCIA EN EL BAÑO, NO DEBIENDOSE PROLONGAR INNECESARIAMENTE LA CALEFACCION

DEJAR ENFRIAR EL MATRAZ SIN QUITAR EL REFRIGERANTE , HASTA ALCANZAR UNA TEMPERATURA DE UNOS 30 GRADOS C Y TRANSVASAR LA DISOLUCION ALCOHOLICA DEL INSAPONIFICABLE AL TUBO DE ENSAYO, ENJUAGANDOSE EL MATRAZ CON OTROS 10 ML DE ALCOHOL DE 85 GRADOS MEDIDOS, TAMBIEN , CON PIPETA, INCORPORANDOLOS AL CONTENIDO DEL TUBO

COLOCAR EL TAPON CON EL TERMOMETRO EN EL TUBO, HOMOGENEIZAR LA MEZCLA E INTRODUCIR EL TUBO EN UN VASO FORMA ALTA DE 150 ML Y EL VASO CON EL TUBO SE LLEVA A UN BAÑO DE AGUA REGULADO A 26 GRADOS C +- 0,50 GRADOS C MANTENIENDOSE ASI EL TIEMPO NECESARIO PARA QUE EL TERMOMETRO REGISTRE LA MISMA TEMPERATURA DEL BAÑO. UNA VEZ ALCANZADA DICHA TEMPERATURA, SACAR EL TUBO, COLOCARLO EN UN SOPORTE E INTRODUCIRLO EN UNA ESTUFA QUE PREVIAMENTE ESTA REGULADA A 23 GRADOS C +- 0,5 GRADOS C MANTENIENDOLO EN REPOSO EN LA ESTUFA DOS HORAS CONTADAS A PARTIR DEL MOMENTO EN QUE ALCANCE LOS 23 GRADOS C

LA FORMACION DE UN PRECIPITADO EN FORMA DE COPOS, SE CONSIDERE COMO POSITIVA. UN PRECIPITADO MAS DIVIDIDO O PULVERULENTO, NO RESULETO EN COPOS, NO PUEDE INTERPRETARSE COMO POSITIVO

35.5.-REFERENCIAS

1.- UNA NORMA ESPAÑOLA, 55004

2.-UNA NORMA ESPAÑOLA , 55019, 1. REVISION 1977

43.-RECONOCIMIENTO DE ESTERES NO GLICERIDOS EN GRASAS COMESTIBLES POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

43.1.-PRINCIPIO

DISOLUCION DE LA MUESTRA EN HEXANO Y POSTEIOR SEPARACION DE LOS TRIGLICERIDOS POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

ES APLICABLE A TODOS LOS ACEITES VIRGENES O REFINADOS, UTILIABLES DIRECTAMENTE EN LA ALIMENTACION HUMANA

EL METODO HA SIDO ESTUDIADO CON ESTERES DE ACIDOS GRADOS Y LOS ALCOHOLES SIGUIENTES: METANOL, 1,2 Y 1,3 PROPILENGLICOL Y ETILENGLICOL

LOS LIMITES DETECTADOS, SEGUN ENSAYO COLABORATIVO EN EL QUE HAN INTERVENIDO CINCO LABORATORIOS, OSCILA ENTRE 0,7 POR 100 (P/P) Y 1 POR 100 (P/P)

43.2.-MATERIAL Y APARATOS

43.2.1.-EQUIPO DE CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA, COMPUESTO DE PLACAS DE GEL DE SILICE G Y UN ESPESOR DE CAPA DE 0,25 MM O DE 0,40 MM EN CASO DE SER NECESARIA UNA MAYOR RESOLUCION

43.2.2.-PLACA CALEFACTORA ADECUADA PARA QUEMAR PLACAS QUE PERMITA ALCANZAR TEMPERATURAS DE 360 GRADOS C

43.2.3.-MICROJERINGA DE 10 MICROL. 43.3.-REACTIVOS

43.3.1.-HEXANO PARA CROMATOGRAFIA (FORMULA OMITIDA )

43.3.2.-ETER ETILICO (FORMULA OMITIDA)

43.3.3. LIQUIDO DE DESARROLLO

MEZCLAR 92 VOLUMENES DE HEXANO Y 8 VOLUMENES DE ETER ETILICO

43. 3.4.-ACIDO SULFURICO AL 50 POR 100

43.4.-PROCEDIMIENTO

DEPOSITAR CON UNA JERINGA 2 A 3 MICROL. DE LA DISOLUCION DE LA MUESTRA EN HEXANO AL 10 POR 100, APROXIMADAMENTE SOBRE LA PLACA DE CROMATOGRAFIA A UNA DISTANCIA APROXIMADA DE 1 CM DEL BORDE INFERIOR DE LA CAPA DE SILICE

INTRODUCIR EN LA CUBETA CONTENIDA EL LIQUIDO DE DESARROLLO HEXANO-ETER ETILICO, ESPERANDO HASTA QUE EL FRENTE DEL DISOLVENTE SE SITUA A UNOS 3 CM. APROXIMADAMENTE DEL BORDE SUPERIOR DE LA PLACA. SACAR LA PLACA DE LA CUBETA Y DEJAR SECAR AL AIRE, LO CUAL SE CONSIGUE EN UNOS MINUTOS. CON EL FIN DE FACILITAR EL RECONOCIMIENTO DE LOS ESTERES MAS DIFICILMENTE SEPARABLES, ES RECOMENDABLE Y NECESARIO EN ALGUNOS CASOS EFECTUAR DOS O TRES DESARROLLOS. PARA ELLO, TERMINADO EL PRIMER DESARROLLO Y UNA VEZ SECA LA PLACA, VOLVER A INTRODUCIR EN LA CUBETA, MANTENIENDOLA HASTA QUE EL FRENTE DE DISOLVENTE SE HAYA SITUADO A LA MISMA ALTURA ANTERIOR. REPETIR EL PROCESO UNA VEZ SI ES NECESARIO. EN LOS CASOS DE DUDA SOBRE EL RESULTADO POSITIVO DE LA PRUEBA, DEBERA REPETIRSE LA CROMATOGRAFIA, SOMETIENDO LA PLACA A DOS O TRES DESARROLLOS

PULVERIZAR LA PLACA SECA CON UNA DISOLUCION DE ACIDO SULFURICO AL 50 POR 100 Y QUEMAR SOBRE LA PLACA CALEFACTORA A UNOS 300 GRADOS C

43.5.-INTERPRETACION DE RESULTADOS

A UN TERCIO APROXIMADAMENTE DEL BORDE INFERIOR DE LA PLACA APARECE UNA MANCHA INTENSA CORRESPONDIENTE A LOS TRIGLICERIDOS. EN ACEITES PUROS NO APARECE POR ENCIMA NINGUNA OTRA MANCHA PROXIMA A LA DE LOS TRIGLICERIDOS , A EXCEPCION DE ALGUNOS COMPONENTES DEL INSAPONIFICABLE QUE MARCHAN CON EL FRENTE DEL DISOLVENTE. UNA MANCHA, MAS O MENOS INTENSA, SITUADA POR ENCIMA, PROXIMA A LA DE LOS TRIGLICERIDOS, ACUSA LA PRESENCIA DE ESTERES EXTRAÑOS A GLICEROL. LA DISTANCIA RELATIVA ENTRE ESTAS DOS MANCHAS DEPENDE, LOGICAMENTE, DEL ALCOHOL DE QUE SE TRATE, LOS ESTERES DE MONOALCOHOLES, TALES COMO EL METILICO O ETILICO, SE SITUAN MAS DISTANCIADOS DE COMO LO HACEN LOS ESTERES DE DIALCOHOLES, TALES COMO EL ETILENGLICOL O PROPILENGLICOL

UNA MANCHA DE MUY DEBIL INTENSIDAD , EN LA POSICION CORRESPONDIENTE A LOS ESTERES METILICOS, NO DEBE SER TOMADA EN CONSIDERACION

43.6.-REFERENCIAS

1.-INSTITUTO DE RACIONALIZACION DEL TRABAJO. UNA NORMA ESPAÑOLA 55.085

49.-ACIDOS DOCOSENOICOS

49.1 .-PRINCIPIO

DETERMINACION CUANTITAVIA, POR CROMATOGRAFIA GASEOSA, DE LOS ACIDOS DOCOSENOICOS CONTENIDOS EN ACEITES Y GRASAS UTILIZADAS EN LA ALIMENTACION HUMANA. CUANDO SE TRATA DE ACEITE DE COLZA ESTOS ACIDOS ESTAN CONSTITUIDOS EXCLUSIVAMENTE POR EL ACIDO ERUCIDO (CIS 13,14 DOCOSENOICO)

EL METODO SE FUNDA EN OBTENER LOS ESTERES METILICOS DE LOS ACIDOS GRASOS CONTENIDOS EN LA MUESTRA PROBLEMA POR METANOLISIS CON METOXIDO SODICO, COMPLETADA CON UNA METANOLISIS ACIDA SI FUERA NECESARIO, ADICIONANDO PREVIAMENTE A LA MUESTRA UNA CANTIDAD DETERMINADA DE TETRACOSATO DE METILO (LIGNOCERATO DE METILO) O EL ACIDO LIBRE QUE SE UTILIA COMO PATRON INTERNO

49.2.-MATERIAL Y APARATOS

49.2.1 .-COMO EN EL METODO OFICIAL N. 41, APARTADOS 2.1 Y 3.1

49.3. REACTIVOS

49.3.1.-COMO EN EL METODO OFICIAL N. 41, APARTADOS 2.2.1, 2.2.2, 2.2.3 Y 2.2.5

49.3.2.-HEPTANO NORMAL, DE PUREZA ADECUADA PARA CROMATOGRAFIA GASEOSA

49.3.3.-DISOLUCION ACUOSA SATURADA DE CLORURO SODICO

49.3.4 .-ERUCATO DE METILO (DOCOSENOATO DE METILO), PATRON PARA CROMATOGRAFIA GASEOSA, CON UNA RIQUEZA MINIMA DEL 99,5 %

49.3.5.-LIGNOCERATO DE METILO (TETRACOSANOATO DE METILO), PATRON PARA CROMATOGRAFIA, CON UNA RIQUEZA MINIMA DE 99% (VER 49.6.1)

49.3.6.-SOLUCION PATRON DE ERUCATO DE METILO, EN HEPTANO, CONTENIENDO 2 MG/ML

49.3.7.-SOLUCION PATRON DE LIGNOCERATO DE METILO, EN HEPTANO, COTENIENDO 2 MG/ML

49.4 .-PROCEDIMIENTO

49.4.1.-PREPARACION DE LA MUESTRA

LA MUESTRA UTILIZADA DEBERA ESTAR SECA Y LIBRE DE SEDIMENTOS CONSTITUIDOS POR MATERIAS EXTRAÑAS. SI NO FUESE ASI, SE FILTRARA PREVIAMENTE POR UN PAPEL FILTRO , AGREGADO, SI FUESE NECESARIO, UNA PEQUEÑA CANTIDAD DE SULFATO SODICO ANHIDRO, PARA RETENER LA HUMEDAD. SI LOS SEDIMENTOS ESTUVIESEN CONSTITUIDOS POR MATERIA GRASA SOLIDA, SE FUNDIRA, CALENTANDO SUAVEMENTE LA MUESTRA, AGITANDO LO NECESARIO PARA CONSEGUIR SU HOMOGENEIZACION

49.4.2.-DETERMINACION DEL FACTOR DE RESPUESTA PARA EL ERUCATO DE METILO EN RELACION AL LIGNOCERATO DE METILO

TOMAR, EXACTAMENTE MEDIDO , 1 ML DE SOLUCION PATRON DE ERUCATO DE METILO (49.3.4), DEPOSITAR EN UN MATRAZ CONICO DE 25 ML, AGREGANDO 3 ML DE LA SOLUCION PATRON DE LIGNOCERATO DE METILO (49.3.5). AGREGAR 4 ML DE HEPTANO Y AGITAR SUAVEMENTE PARA HOMOGENEIZAR LA MEZCLA

PREPARAR OTRAS DOS SOLUCIONES TOMANDO, RESPECTIVAMENTE 2 Y 3 ML DE LA SOLUCION DE ERUCATO, Y AÑADIENDO EN CADA CASO 3 ML DE LA SOLUCION DE LIGNOCERATO, COMPLETANDO CON HEPTANO HASTA UN VOLUMEN TOTAL DE 8 ML

EL FACTOR DE RESPUESTA SE OBTIENE APLICANDO LA SIGUENTE FORMULA:

(FORMULA OMITIDA)

49.4.3. -PREPARACION DE LOS ESTERES METILICOS

EN UN MATRAZ DE METILACION SECO, PESAR, CON PRECISION DE 0,1 MG, 50 MG DE LA MUESTRA CONVENIENTEMENTE PREPARADA, AGREGANDO 3 ML DE LA SOLUCION PATRON DE LIGNOCERATO DE METILO (VER 49.6.1) Y 10 ML DE LA SOLUCION DE METILATO SODICO. AGREGAR 2 O 3 TROCITOS DE PLATO POROSO, COLOCAR EL REFRIGERANTE, CALENTAR HASTA EBULLICION SUAVE, QUE SE MANTIENE DURANTE UNA HORA. AL CABO DE ESTE TIEMPO Y SIN INTERRUMPIR LA EBULLICION, AGREGAR, POR LA BOCA SUPERIOR DEL REFRIGERANTE, 10 ML DE LA SOLUCION METANOLICA DE CLORHIDRICO , CONTINUANDO LA EBULLICION DURANTE 15 MINUTOS (VER 49.6.2)

AL CABO DE ESTE TIEMPO, DEJAR ENFRIAR EL MATRAZ Y, UNA VEZ FRIO QUITAR EL REFRIGERANTE, ADICIONANDO 5 ML DE HEPTANO; TAPONAR EL MATRAZ, AGITANDO FUERTEMENTE DURANTE UN MINUTO. ADICIONAR SOLUCION ACUOSA SATURADA DE CLORURO SODICO HASTA SITUAR LA CAPA DE HEPTANO EN EL CUELLO DEL MATRAZ

49.4.4.-CROMATOGRAFIA GASEOSA DE LOS ESTERES

INYECTAR 2 MICROL. DE LA SOLUCION DE HEPTANO (VER 49.6.3)

LAS CONDICIONES OPERATIVAS MAS ADECUADAS DEBEN SER ESTABLECIDAS POR EL OPERADOR A LA VISTA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON LAS MEZCLAS PATRONES DE ESTERES METILICOS . COMO ORIENTACION, Y SI SE UTILIZA EL RELLENO RECOMENDADO EN EL METODO OFICIAL N. 41, APARTADO 3, SE PUEDEN INDICAR LAS SIGUENTES: TEMPERATURA DEL INYECTOR 250 GRADOS C; TEMPERATURA DE LA COLUMNA 190 GRADOS C ; TEMPERATURA DEL DETECTOR 250 GRADOS C. EL FLUJO DE NITROGENO DEBERA SER REGULADO PARA OBTENER UN TIEMPO DE RETENCION PARA EL LIGNOCERATO DE UNOS 17 MINUTOS, OBTENIENDOSE NORMALMENTE ESTA RETENCION CON 30-40 ML/MIN.

DETERMINAR LA RESPUESTA DEL DETECTOR PARA EL PICO DE LOS ESTERES DE LOS ACIDOS DOCOENOICOS Y LIGNOCERICO Y EL LIGNOCERATO POR CUALQUIERA DEL LOS PROCEDIMIENTOS QUE SE UTILIZAN CON ESTE FIN

49.5.-CALCULOS

% DE ACIDOS DOCOSENOICOS EN EL ACEITE

(FORMULA OMITIDA)

49.6 .-NOTAS

49.6.1.-EN LUGAR DEL ERUCATO Y LIGNOCERATO DE METILO SE PUEDEN UTILIZAR COMO PATRONES LOS ACIDOS LIBRES, SIEMPRE QUE TENGAN UN MINIMO DE PUREZA DEL 99%

EN ESTE CASO, PARA DETERMINAR EL FACTOR DE RESPUESTA ERUCATO/LIGNOCERATO, SE DEBERAN TOMAR LOS VOLUMENES DE SOLUCIONES PATRONES QUE SE INDICAN EN EL APARTADO 49.4.2, RECOGIENDOLOS EN UN MATRAZ DE METILACION SE ELIMINA EL DISOLVENTE CON UNA CORRIENTE DE NITROGENO PURO Y SECO Y SE METILA OMITIENDO LA ADICION DE METILATO SODICO ADICIONANDO 10 ML DE SOLUCION CLORHIDRICA DE METANOL E HIRVIENDO A REFLUJO DURANTE UNA HORA. SE SIGUE COMO SE INDICA EN EL APARTADO 49.4.3

49.6.2.- SI LA MUESTRA ANALIZADA ESTA CONSTITUIDA POR UNA GRASA NEUTRA COMO ES EL CASO NORMAL AL TRATARSE DE ACEITES DE SEMILLAS REFINADOS, Y EL PATRON UTILIZADO ES EL LIGNOCERATO DE METILO, BASTARA EFECTUAR SOLAMENTE LA METILACION ALCAINA, SIN QUE SEA NECESARIO LA UTILIZACION DE LA SOLUCION CLORHIDRICA EN METANOL

SEGUN ESTO, TRANSCURRIDO EL PERIODO DE EBULLICION DE UNA HORA, DESPUES DE AGREGAR LA SOLUCION DE METILATO, SE DEJA ENFRIAR, SE AGREGAN 10 ML DE SOLUCION ACUOSA DE CLORHIDRICO IN Y 5 ML DE HEPTANO, CONTINUANDO COMO SE INDICA EN EL ULTIMO PARRAFO DEL APARTADO 49.4.3

SI FUESE NECESARIA LA METILACION DE ACIDOS LIBRES PROVENIENTES DE LA MUESTRA O DEL PATRON POR UTILIZAR ACIDO LIGNOCERICO, SE PROCEDERA COMO EN 49.4.3

49.6.3. AJUSTANDOSE ESTRICTAMENTE A LAS CONDICIONES OPERATIVAS INDICADAS EN TODO EL CURSO DE LA METODICA, LA CANTIDAD INYECTADA DE ERUCATO Y LIGNOCERATO NO DEBE SOBREPASAR, EN CADA CASO, DE 10 UG. EN CUALQUIER CASO, PARA OBTENER UNA RESPUESTA CUANTITATIVA CORRECTA, ESTE LIQUIDO NO DEBE SOBREPASARSE, SIRVIENDO LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN LA DETERMINACION DEL FACTOR DE RESPUESTA, TAL COMO SE DESCRIBE EN EL APARTADO 49.4.2 , PARA APRECIAR LOS LIMITES DE LINEALIDAD EN LA RESPUESTA DEL DETECTOR

ANEXO II.-AGUAS

14.-FLUOR

14.1.-PRINCIPIO

DETERMINACION DIRECTA DEL FLUOR POR POTENCIOMETRIA, UTILIZANDO UN ELECTRODO IONICO SELECTIVO

14.2.-MATERIAL Y APARATOS

14.2.1.-POTENCIOMETRO CON ESCALA EXPANDIDA QUE PERMITA APRECIAR 0,1 MV

14.2.2.-ELECTRODO SELECTIVO DE FLUORURO

14.2.3.-ELECTRODO DE REFERENCIA (PREFERENTEMENTE UNO DE DOBLE UNION CUYO DEPARTAMENTO INTERNO CONTIENE SOLUCION SATURADA DE CIK Y EL EXTERNO UNA SOLUCION IN RESPECTO A NO3K Y CLNA)

14.2.4.-RECIPIENTES DE PLASTICO DE 50, 100 Y 1.000 CM CUBICOS DE CAPACIDAD

14.2.5.-PIPETAS DE PRECISION

14.2.6.-AGITADOR MAGNETICO

14.3.-REACTIVOS

14.3.1.-SOLUCION PATRON DE FLUORURO CONTENIENDO 1 G DE F- POR LITRO. PESAR 2,210 G DE FNA (DESECADA A 110 GRADOS C DURANTE CUATRO HORAS) DISOLVER Y ENRASAR A 1 LITRO CON AGUA DESIONIZADA

14.3.2.-SOLUCION AMORTIGUADORA (TISAB ). DISOLVER EN UN LITRO DE AGUA DESIONIZADA 58,5 G DE CLNA; 15 CM CUBICOS DE ACIDO ACETICO GLACIAL; 102,06 G DE ACETATO SODICO TRIHIDRATADO (61,53 G SI ES ANHIDRO); Y 0,3 G DE CITRATO SODICO DIHIDRATADO (0,4 G SI SE TIENE II MOLES DE AGUA), COMPROBANDO QUE SE PH QUEDA COMPRENDIDO ENTRE 5,00 Y 5,50. AJUSTAR SI ES NECESARIO

ESTA SOLUCION PUEDE SUSTITUIRSE POR OTRA CONSTITUIDA POR 57 CM CUBICOS DE ACIDO ACETICO GLACIAL; 58,5 G. DE CLNA; 4 G DE CDTA (ACIDO HEXILEN 1,2-DINITRO-TETRACETATO SODICO ) Y NAOH EN CANTIDAD SUFICIENTE (UNOS 125 CM CUBICOS) PARA OBTENER UN PH 5,00-5,50, COMPLETANDO CON AGUA DESIONIZADA HASTA 1 LITRO

14.3.3 .-SOLUCION EXTERIOR PARA EL ELECTRODO DE REFERENCIA. DISOLVER 10,1 G DE NO3K Y 5,85 DE CLNA EN AGUA HASTA 100 CM CUBICOS

14.4.-PROCEDIMIENTO

14.4.1.-OBTENCION DE LA CURVA PATRON. PUESTO ELPOTENCIOMETRO EN REGIMEN DE TRABAJO, INTRODUCIR LOS ELECTRODOS SELECTIVO Y DE REFERENCIA EN UNA MEZCLA COMPUESTA POR 20 CM CUBICOS DE SOLUCION PATRON DE 1 MG DE F- POR LITRO Y 20 CM CUBICOS DE UNA DE LAS SOLUCIONES TISAB. AGITAR, ESPERAR A QUE SE ESTABILICE LA LECTURA Y ANOTARLA

EXTRAER LOS ELECTRODOS, LAVARLOS CON AGUA DESIONIZADA, SECARLOS CON PAPEL DE FILTRO Y VOLVER A INTRODUCIRLOS EN UNA MEZCLA DE 20 CM CUBICOS DE SOLUCION PATRON DE 10 MG DE F- POR LITRO Y 20 CM CUBICOS DE SOLUCION TISAB. AGITAR, ESPERAR LA ESTABILIZACION DE LA LECTURA Y ANOTARLA

SI EL ELECTRODO FUNCIONA EN CONDICIONES OPTIMAS, LA DIFERENCIA ENTRE AMBAS LECTURAS DEBE OSCILAR ENTRE 56 Y 59 MV DEPENDIENDO DE LA TEMPERATURA A QUE SE EFECTUARON LAS MEDIDAS

14.4.2.-DETERMINACION. OPERAR CON LA MUESTRA COMO SE HA INDICADO ANTERIORMENTE

24.5.-CALCULOS

CALCULAR EL CONTENIDO DE FLUOR EXPRESADO EN MG/LITRO MEDIANTE COMPARACION CON LA CURVA PATRON, TENIENDO EN CUENTA QUE ESTA PUEDE SER EXTRAPOLADA HASTA 0,2 MG DE F- POR LITRO, UTILIZANDO PAPEL SEMILOGARITMICO

14.6 .-OBSERVACIONES

14.6.1.-DIFERENCIAS DE LECTURA ENTRE DOS PATRONES (1 Y 10 MG DE F- POR LITRO) INFERIORES A 40-45 MV INDICAN NORMALMENTE QUE EL ELECTRODO SELECTIVO HA PERDIDO SENSIBILIDAD Y DEBE CAMBIARSE . EL PERIODO DE VIGENCIA DEL ELECTRODO DE FLUOR VIENE A SER DE 12 A 18 MESES CON UN USO DIARIO NORMAL

14.6.2.-HABIDA CUENTA QUE LA TEMPERATURA DE LA SOLUCION AFECTA A LS LECTURAS, TANTO LAS MEDIDAS DE LAS SOLUCIONES PATRON COMO LAS DE LAS MUESTRAS DEBEN REALIZARSE A LA MISMA TEMPERATURA

14.6.3.-LAS INTERFERENCIAS PRODUCIDAS POR LOS IONES (SIMBOLOS OMITIDOS), AL FORMAR COMPLEJOS CON EL ION F- Y EL ION OH- A PH SUPERIORES A 8, QUEDAN ELIMINADAS CON EL EMPLEO DE SOLUCION TISAB

14.6.4.-LAS MUESTRAS Y SOLUCIONES A UTILIZAR DEBEN CONSERVARSE EN RECIPIENTES DE PLASTICO

14.6.5.-PARA CONCENTRACIONES INFERIORES A 0,2 MG/L F- DEBE UTILIZARSE EL METODO DE ADICION CONOCIDA

15(A).-BORO (CURCUMINA)

15(A).1.-PRINCIPIO

ACIDIFICACION Y EVAPORACION DE LA MUESTRA EN PRESENCIA DE CURCUMINA , FORMACION DE UN COMPUESTO DE COLOR ROJO Y POSTERIOR MEDIDA ESPECTROFOTOMETRICA DE COLOR DESARROLLADO PREVIA DISOLUCION EN ETANOL

EL METODO ES APLICABLE EN PRESENCIA DEL ION NO3- EN CONCENTRACIONES INFERIORES A 100 MG/L

15(A).2.-MATERIAL Y APARATOS

15(A).2.1.-ESPECTROFOTOMETRO CAPAZ DE EFECTUAR LECTURAS A 546 MN, EQUIPADO CON CUBETAS DE 1 CM DE PASO DE LUZ

15(A).2.2.-EQUIPO NORMAL DE VIDRIO (EXENTO DE BORO) CUARZO O PLATINO

15(A).2.3.-BAÑO DE AGUA REGULADA A 55 GRADOS +- 3 GRADOS C

15(A).3.-REACTIVOS

15(A).3.1.-ETANOL AL 95% (V/V)

15(A).3.2.-ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO

15(A).3.3.-SOLUCION DE BORO: DISOLVER 571,6 MG DE ACIDO BORICO EN AGUA DESMINERALIZDA Y COMPLETAR HASTA UN LITRO (1 ML <> 100 MICROGRAMOS DE BORO)

15(A).3.4.-SOLUCION PATRON DE BORO : DILUIR 10 ML DE SOLUCION DE BORO (15.3.3) HASTA UN LITRO DE AGUA DESMINERALIZADA (1ML <> 1 MICROGRAMO DE BORO)

15(A).3.5.-REACTIVO DE CURCUMINA: DISOLVER 40 MG DE CURCUMINA (2 -CH3O C6 H3 - 1 - OH - 4CH = CHCO)2CH2 Y 5 G DE ACIDO OXALICO EN 80 ML DE ETANOL AL 95 % (15(A).3.1). AÑADIR 4 ML DE ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO Y LLEVAR A 100 ML DE ETANOL DE 95%, UTILIZANDO MATRAZ AFORADO. (ESTA SOLUCION ES ESTABLE ALREDEDOR DE 15 DIAS SI SE GUARDA EN FRASCO COLOR TOPACIO Y SE MANTIENE EN REFRIGERADOR)

15(A).4.-PROCEDIMIENTO.

15(A).4.1.-OBTENCION DE LA CURVA DE CALIBRADO. INTRODUCIR EN CAPSULAS DE EVAPORACION DEL MISMO TIPO Y TAMAÑO O, 0,25; 0,50; 0,75 Y 1,0 ML DE SOLUCION PATRON DE BORO (15 (A).3.4). AÑADIR AGUA DESMINERALIZADA A CADA CAPSULA PARA OBTENER UN VOLUMEN TOTAL DE 1 ML. AGREGAR 4,0 ML DE REACTIVO DE CURCUMINA (15(A).3.5) A TODAS ELLAS Y MEZCLAR CUIDADOSAMENTE. EVAPORAR EN BAÑO DE AGUA A 55 GRADOS +-3 GRADOS C, MANTENIENDO LOS RESIDUOS A ESTA TEMPERATURA DURANTE 30 MINUTOS EN ESTUFA. DEJAR ENFRIAR HASTA TEMPERATURA AMBIENTE. AÑADIR ETANOL AL 95% (15(A).3.1) Y DISOLVER TRITURANDO, LLEVAR A MATRAZ AFORADO COMPLETANDO A 25 ML. FILTRAR LAS SOLUCIONES (SI ES PRECISO) POR FILTRO DE PAPEL LENTO. (WHATMAN 30 O EQUIVALENTE ). LLEVAR UNA PARTE DE LOS FILTRADOS A LA CUBETA DEL INSTRUMENTO DE MEDIDA Y LEER A 546 NM DENTRO DE LA PRIMERA HORA SUBSIGUIENTE AL SECADO

CON LOS DATOS OBTENIDOS CONSTRUIR LA CURVA PATRON

15(A).4.2.-DETERMINACION: TOMAR 1 ML, DE LA MUESTRA Y OPERAR EXACTAMENTE IGUAL QUE EN 15(A).4.1. SI AL EFECTUAR EL ANALISIS APARECIESE UNA CONCENTRACION EXCESIVA DE BORO, DEBE REPETIRSE EL ENSAYO DILUYENDO LA MUESTRA CON AGUA DESMINERALIZADA, HASTA UN VOLUMEN CONOCIDO Y TOMANDO 1 ML DEL MISMO PARA LA VALORACION

15(A).5.-CALCULOS

CALCULAR EL CONTENIDO DE BORO EXPRESDO EN MG/LITRO MEDIANTE COMPARACION CON LA CURVA DE CALIBRADO, TENIENDO EN CUENTA, SI ES NECESARIO, LA DILUCION DE LA MUESTRA

15(A).6.-OBSERVACIONES

15(A).6.1.-EL METODO SIGUE LA LEY DE LAMBERT-BEER HASTA 2 MG DE BORO POR LITRO. LA CANTIDAD MINIMA DETECTABLE DE BORO ES DE 0,2 MG/LITRO

15(A).7.-BIBLIOGRAFIA

1.-BUNNTON N.6 Y TAIT B.H.-1969-J. AMER. WATER WORKS ASS. 61:357

2.-STANDARD METHODS (APHA - AWWA-WPCF) - 1975:287

16.-MERCURIO

16.1.-PRINCIPIO

CONVERSION DE LOS COMPUESTOS ORGANO MERCURIALES EN SALES INORGANICAS DE MERCURIO, REDUCCION DE LOS IONES MERCURICOS A MERCURIO METALICO POR LA ACCION DEL SN++, VOLATILIZACION DEL MERCURIO METALICO Y ARRASTRE DEL MISMO HASTA LA CELULA DE ABSORCION MEDIANTE UNA CORRIENTE DE GAS Y DETERMINACION DE LA ABSORBANCIA DE 253,7 NM

16.2.-MATERIAL Y APARATOS

16.2.1.-ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCION ATOMICA

16.2.2. -LAMPARA DE MERCURIO DE CATODO HUECO

16.2.3.-CAMARA DE ABSORCION CON VENTANAS DE CUARZO, ACOPLABLE AL ESPECTROFOTOMETRO

16.2.4.-EQUIPO DE REDUCCION DEL ION MERCURICO METALICO Y DE ARRASTRE DE ESTE CON CORRIENTE DE GAS HASTA LA CAMARA DE ABSORCION, INCLUYENDO UN SISTEMA DE DESECACION

16.2.5.-EQUIPO DE SUMINISTRO DE GAS CON FLUJO REGULABLE

16.2.6.-TUBO FLEXIBLE DE TIGON DE 1/2 CM DE DIAMETRO INTERIOR PARA LAS CONEXIONES NECESARIAS

16.2.7.-REGISTRADOR DE LAS INTENSIDADES DE ABSORCION, DE VOLTAJE Y VELOCIDAD VARIABLES

16.3.-REACTIVOS

16.3.1 .-ACIDO SULFURICO CONCENTRADO

16.3.2.-ACIDO NITRICO CONCENTRADO

13.3 .-PERMANGANATO POTASICO AL 5% P/V EN AGUA DESIONIZADA

16.3.4.-PERSULFATO POTASICO A 5% P/V EN AGUA DESIONIZADA

16.3.5.-HIDROXILIMINA- CLORURO SODICO AL 12% P/V EN AGUA DESIONIZADA. DISOLVER 12 G DE CLORURO DE HIDROXILAMINA Y 12 G DE CLORURO DE SODIO EN AGUA DESIONIZADA Y COMPLETAR EL VOLUMEN A 100 ML

16.3.6.-CLORURO ESTANOSO AL 20% P/V EN ACIDO CLORHIDRICO AL 20% V/V. DISOLVER 20 G DE CLORURO ESTANNOSO EN 40 ML DE ACIDO CLORHIDRICO AL 50% Y COMPLETAR EL VOLUMEN A 100 ML CON AGUA DESIONIZADA

16.3.7.-SOLUCION PATRON DE MERCURIO DE 1.000 MG/L . DISOLVER 0,1354 G DE CLORURO MERCURICO EN 75 ML DE AGUA DESIONIZADA , AÑADIR 10 ML DE ACIDO NITRICO CONCENTRADO Y AJUSTAR EL VOLUMEN A 100 ML. ESTA SOLUCION MANTENIDA EN REFRIGERADOR PUEDE CONSERVARSE UN AÑO

16.3.8.-SOLUCION PATRON DE MERCURIO DE 0,1 MG/L. SE OBTIENE DE LA ANTERIOR POR SUCESIVAS DILUCIONES CON AGUA DESIONIZADA, LLEVANDO LA CONCENTRACION FINAL DE ACIDO NITRICO AL 0,15% V/V. DEBE PREPARARSE , AL IGUAL QUE LAS SOLUCIONES INTERMEDIAS, DIARIAMENTE

16.4.-PROCEDIMIENTO

16.4.1.-OBTENCION DE LA CURVA DE CALIBRADO. TRANSFERIR ALICUOTAS DE 0: 0,5: 1,0: 2,0: 5,0 Y 10 ML DE LA SOLUCION PATRON DE 0,1 PPM (16.3.8) QUE CONTIENEN DE 0 A 1 MICROG DE MERCURIO A MATRACES ERLENMEYER DE 250 ML. AÑADIR AGUA DESTILADA A CADA MATRAZ HASTA UN VOLUMEN TOTAL DE 100 ML. MEZCLAR ENERGICAMENTE Y AÑADIR 5 ML DE ACIDO SULFURICO CONCENTRADO (16.3.1) Y 2,5 ML DE ACIDO NITRICO CONCENTRADO (16.3.2 ) A CADA MATRAZ. AÑADIR 15 ML DE LA SOLUCION DE PERMANGANATO POTASICO (16.3.3.) A CADA MATRAZ Y DEJAR EN REPOSO, AL MENOS 15 MINUTOS. AÑADIR 8 ML DE PERSULFATO POTASICO (16.3.4) A CADA MATRAZ Y CALENTAR EN UN BAÑO DE AGUA DURANTE DOS HORAS MANTENIENDO LA TEMPERATURA A 95 GRADOS C. ENFRIAR Y AÑADIR 6 ML DE CLORUROSODICO-CLORURO DE HIDROXILAMINA (16.3.5) PARA REDUCIR EL EXCESO DE PERMANGANATO. CUANDO LA SOLUCION SE HA DECOLORADO TRANSFERIR AL MATRAZ DEL EQUIPO DE REDUCCION (16.2.4) UNA ALICUOTA O LA TOTALIDAD DE LA MISMA, DE ACUERDO CON EL EQUIPO DE QUE SE DISPONGA, AGREGAR 0,5 ML DE CLORURO ESTANNOSO (16.3.6) POR CADA 10 ML DE LA SOLUCION DECOLORADA TRANFERIDA (5 ML SI SE TRANSFIERE LA TOTALIDAD) Y SEGUIDAMENTE, SIN AGITACION CONECTAR EL MATRAZ AL SISTEMA DE AIREACION PREVIAMENTE AJUSTADO AL FLUJO DESEADO (1 LITRO/MINUTO EN LOS EQUIPOS CORRIENTES). AL INICIARSE LA AIREACION SE PRODUCIRA UNA ABSORBANCIA CRECIENTE QUE ALCANZARA UNA MAXIMO DENTRO DE LOS 30 SEGUNDOS PARA INICIAR UN DESCENSO PROGRESIVO HASTA ALCANZAR NUEVAMENTE EL VALOR CERO, MOMENTO EN EL CUAL PUEDE INICIARSE LA REDUCCION Y AIREACION DEL SIGUIENTE PATRON

REPRESENTANDO EN ABCISAS LAS CONCENTRACIONES DE LOS DISTINTOS PATRONES Y EN ORDENADAS LAS ALTURAS DE LOS CORRESPONDIENTES MAXIMOS DE ABSORCION, SE OBTIENE LA CURVA DE CALIBRADO

16.4.2.-DETERMINACION . TRANSFERIR 100 ML DE AGUA PROBLEMA O UNA ALICUOTA DILUIDA A 100 ML QUE NO CONTENGA MAS DE 1,0 UG DE MERCURIO A UN MATRAZ ERLENMEYER DE 250 ML Y CONTINUAR COMO EN 16.4.1

16.5.-CALCULOS

CALCULAR EL CONTENIDO DE MERCURIO EXPRESADO EN MG/LITRO MEDIANTE COMPARACION CON LA CURVA DE CALIBRADO, TENIENDO EN CUENTA, SI ES NECESARIO, LA DILUCION DE LA MUESTRA

16.6.-OBSERVACIONES

16.6.1.-PARA MUESTRAS DE AGUAS RESIDUALES PUEDE SER NECESARIO MAS PERMANGANATO. AGITAR Y AÑADIR PORCIONES ADICIONALES DE PERMANGANATO, SI FUESE NECESARIO, HASTA QUE PERSISTA AL MENOS DURANTE 15 MINUTOS EL COLOR PURPURA

16.7.-BIBLIOGRAFIA

1.-STANDARD METHODS FOR THE EXAMINATION OF WATER AND WASTEWATER, 14 EDITION, 1975, PAGS. 156-159

2.-METHOD FOR CHEMICAL ANALYSIS OF WATER AND WASTES. U.S. ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY (E.P.A. -625- 6/74-003 ) 1974 PAGS. 118-126. NACIONAL ENVIRONMENTAL RESEARCH CENTER CINCINNATI . OHIO 45268- U.S.A

3.-GLOBAL ENVIRONMENTAL MONITORING SYSTEM ETS 78.8 PAG. 119

ANEXO III.-CARNE Y PRODUCTOS CARNICOS

16.-TIURACILOS

16.1.-PRINCIPIO

EXTRACCION DEL ANTITIROIDEO CON METANOL, EVAPORACION DEL DISOLVENTE, DILUCION CON AGUA Y PURIFICACION CON ETER. EVAPORACION DEL EXTRACTO ACUOSO A SEQUEDAD, POSTERIOR RECOGIDA DE CLOROFORMO-METANOL , CROMATOGRAFIA EN COLUMNA DE OXIDO DE ALUMINIO Y POSTERIOR DESARROLLO DEL COLOR CON DICLOROQUINONA-CLORIMIDA EN TAMPON ADECUADO

APLICABLE A MUESTRAS DE TIROIDES

16.2.- MATERIAL Y APARATOS

16.2.1.-ROTAVAPOR CON VACIO

16.2.2.-CENTRIFUGA CAPAZ DE ALCANZAR 4.000 R.P.M.

16.2.3 .-ESPECTROFOTOMETRO O COLORIMETRO CAPAZ DE EFECTUAR LECTURAS A 435 NM

16.2.4.-TRITURADORA

16.3.-REACTIVOS

16.3.1.-CLOROFORMO

16.3.2. -METANOL

16.3.3.-MEZCLA CLOROFORMO-METANOL (1-1)

16.3.4.-MEZCLA DE 75 POR 100 DE METANOL-AGUA DESTILDA (3-1)

16.3.5.-SOLUCION TAMPON PH 7,6: DISOLVER 24,3 G DE TRIS (HIDROXIMETIL) AMINOMETANO (TRIS) EN 800 ML DE AGUA DESTILADA Y AJUSTAR A PH 7,6 CON ACIDO CLORHIDRICO 6N

16.3.6.-SOLUCION DE DICLOROQUINONA-CLORIMIDA. DISOLVER 20 MG DE 2,6 DICLOROQUINOCLORIMIDA EN 50 ML DE ISOPROPANOL

16.3.7.-TIURACILO PURO

16.3.8.-SOLUCION PATRON DE TIURACILO. DISOLVER 25 MG DE TIURACILO EN 250 ML DE METANOL. DE ESTA SOLUCION SE LLEVAN 5 ML A UN MATRAZ AFORADO DE 25 ML, ENRASANDO CON METANOL

16.3.9.-OXIDO DE ALUMINIO NEUTRO DE GRADO DE ACTIVIDAD 1 (SECAR DURANTE 2 HORAS A 100 GRADOS C AL VACIO, EN PRESENCIA DE P2O5 DEJAR ENFRIAR Y GUARDAR EL FRASCO DE TAPON ESMERILADO EN DESECADOR)

16.3.10.-PREPARACION DE LA COLUMNA CROMATOGRAFICA. INTRODUCIR 6 G DE OXIDO DE ALUMINIO EN UN ERLENMEYER DE 100 ML, DE BOCA ESMERILADA. AGREGAR 0,6 MG DE AGUA DESTILADA Y CALENTAR EN BAÑO MARIA A 70 GRADOS C DURANTE 10 MINUTOS AGITANDO ENERGICAMENTE. DEJAR ENFRIAR MANTENIENDO LA AGITACION. AGREGAR, APROXIMADAMENTE , 10 ML DE LA MEZCLA CLOROFORMO-METANOL AL MATRAZ Y PASAR A LA COLUMNA CROMATOGRAFICA (DIAMETRO INTERIOR 16 MM Y 30 CM DE LARGO), CUYA EXTREMIDAD INFERIOR ESTA TAPADA CON ALGODON. LA ACTIVIDAD DEL OXIDO DE ALUMINIO DEBE SER CONTROLADA POR UN ENSAYO DE RECUPERACION CON LA SOLUCION PATRON DE TIURACILO. TOMAR 10 ML DE ESTA SOLUCION, CROMATOGRAFICA Y DESARROLLAR EL COLOR. MEDIR LA DENSIDAD OPTICA (D.O.) SEGUN EL METODO QUE A CONTINUACION SE DESCRIBE. A LA VEZ DESARROLLAR EL COLOR CON 10 ML DE LA SOLUCION PATRON DE TIURACILO NO CROMTOGRAFIADA. LAS DENSIDADES OPTICAS EN LOS DOS CASOS DEBEN SER IDENTICAS

16.4.-PROCEDIMIENTO

16.4.1.-DETERMINACION

PESAR EN EL VASO DE LA TRITURADORA 20 G DE LA MUESTRA, PREPARADA SEGUN EL METODO N. 1, O 5 G SI SE TRATA DE TIROIDES . AGREGAR 10 ML DE METANOL Y HOMOGENEIZAR DURANTE UNOS MINUTOS. A CONTINUACION PASAR EL CONTENIDO DEL VASO A UNOS TUBOS DE CENTRIFUG Y CENTRIFUGAR DURANTE 5 MINUTOS A 2.000 R.P.M. PASAR EL SOBRENADANTE A UN MATRAZ DE BOCA ESMERILADA, LLEVANDOLO AL ROTAVAPOR A 60 GRADOS C PARA REDUCIR EL VOLUMEN A UN CUARTO DEL INICIAL, CON AYUDA DE VACIO

TRASLADAR EL SOBRENADANTE A UNA AMPOLLA DE DECANTACION DE 250 ML DE CAPACIDAD, LAVANDO EL MATRAZ CON 25 ML DE AGUA DESTILADA E INCORPORANDOLA TAMBIEN A LA AMPOLLA DE DECANTACION, AGREGAR SEGUIDAMENTE 60 ML DE ETER ETILICO, AGITAR DURANTE UNOS MINUTOS, DEJAR DECANTAR Y RECOGER LA PARTE ACUOSA EN UN MATRAZ DE BOCA ESMERILADA. SEGUIDAMENTE SE LAVA DE NUEVO EL ETER CON 12 ML DE AGUA DESTILADA RECOGIENDOLO TAMBIEN EN EL MATRAZ. LLEVAR EL MATRAZ QUE CONTIENE LA FRACCION ACUOSA AL ROTAVAPOR Y EVAPORAR A SEQUEDAD CON AYUDA DE VACIO Y A UNA TEMPERATURA DE 60 GRADOS C

EL RESIDUO ASI OBTENIDO SE RECOGE CON 30 ML DE LA MEZCLA CLOROFORMO-METANOL Y SE TRASVASA A LA COLUMNA CROMATOGRAFICA , DEJANDO DESCENDER EL LIQUIDO HASTA 0,5 CM. POR ENCMA DE LA CAPA DE OXIDO DE ALUMINIO. LAVAR LA COLUMNA PRIMERO CON 30 ML DE LA MEZCLA CLOROFORMO-METANOL Y DESPUES CON 30 ML DE METANOL. DEJAR BAJAR EL LIQUIDO, VIGILANDO QUE LA COLUMNA QUEDE SIEMPRE SUMERGIDA. LAVAR EL MATRAZ DE EVAPORACION CON 35 ML DE METANOL AL 75% PARA DISOLVER EVENTUALMENTE LAS ULTIMAS TRAZAS DEL RESIDUO Y TRASVASAR EL LIQUIDO A LA COLUMNA. DESCARTAR LOS 8 PRIMEROS ML DE LA MEZCLA Y RECOGER EL RESTO EN UN MATRAZ DE BOCA ESMERILADA. LAVAR POR ULTIMA VEZ EL MATRAZ CON 20 ML DE METANOL Y PASARLOS A LA COLUMNA

EVAPORAR A SEQUEDAD EL CONTENIDO DEL MATRAZ EN ROTAVAPOR A 60 GRADOS C, CON AYUDA DE VACIO, RECOGER EL RESIDUO DE LA EVAPORACION EN 20 ML DE LA SOLUCION TAPON, PH 7,6, AÑADIR 2 ML DE LA SOLUCION DE DICLOROQUINONA-CLORIMIDA , AGITAR 20 SEGUNDOS Y DEJAR REPOSAR 20 MINUTOS

TRASVASAR LA SOLUCION A UNA AMPOLLA DE DECANTACION DE 250 ML, LAVAR EL MATRAZ CON 4 ML DE CLOROFORMO PASANDOLOS A LA AMPOLLA DE DECANTACION Y AGITAR. DEJAR REPOSAR Y RECOGER EL EXTRACTO CLOROFORMICO EN UNA PROBETA DE 10 ML . REALIZAR UN NUEVO LAVADO CON 5 ML DE CLOROFORMO, RECOGERLO EN LA PROBETA Y ENRASAR A 10 ML

HOMOGENEIZAR EL EXTRACTO CLOROFORMICO Y PASARLO A UN TUBO DEL COLORIMETRO EL CUAL SE LLEVA A LA CENTRIFUGA A 4.000 R.P.M. HASTA QUE EL LIQUIDO QUEDA COMPLETAMENTE CLARO, LEYENDO LA DENSIDAD OPTICA A 135 NM, CON CLOROFORMO COMO REFERENCIA

16.4.2 .-OBTENCION DE LA CURVA DE CALIBRADO

PONER VOLUMENES DE 1,2 Y 4 ML DE LA SOLUCION PATRON DE TIURACILO EN UN ERLENMEYER DE 100 ML, EVAPORAR A SEQUEDAD EN ROTAVAPOR A 60 GRADOS C Y DEJAR ENFRIAR. RECOGER EL RESIDUO EN 20 ML DE LA SOLUCION TAMPON PH 7,6; AÑADIR 2 ML DE LA SOLUCION DE DICLOROQUINONA-CLORIMIDA Y DEJAR REPOSAR 20 MINUTOS. TRSVASAR EL CONTENIDO A UNA AMPOLLA DE DECANTACION Y AGITAR. DEJAR REPOSAR Y RECOGER EL EXTRACTO CLOROFORMICO EN PROBETA DE 10 ML, HACER UN SEGUNDO LAVADO CON 5 ML DE CLOROFORMO, AGITAR, RECOGER EN LA PROBETA Y ENRASAR A 10 ML. HOMOGENEIZAR, PASAR EL TUBO DEL COLORIMETRO, CENTRIFUGAR Y LEER EN EL COLORIMETRO A 435 NM

CON LOS DATOS OBTENIDOS CONSTRUIR LA CURVA DE CALIBRADO

16.5.-CALCULOS

CALCULAR EL CONTENIDO EN TIURACILO EXPRESADO EN PPM MEDIANTE COMPARACION CON LA CURVA DE CALIBRADO, TENIENDO EN CUENTA, SI ES NECESARIO, LA DILUCION DE LA MUESTRA

16.6 .-REFERENCIAS

1.-DOSAGE DU METHYTHIOURACILE (MTU) DANS LE VIANDE. VAN WAES H. REV. AGRIC. 26; 435-439 (1973)

2.-THIOURACILE AND POLLUTION ALIMENTAIRES. RECHERCHE ET DOSAGE DU MTU DANS LE VIANDE, LES ORGANES ANIMAUX ET LES EXCREMENTS, FAMERCE, L., VAN WAES H., MEDECINE/BIOLOGIE/ENVIRONNEMENT, JANUARY-JUNE 15, 20 (1975)

ANEXO IV.-FERTILIZANTES

6(A).-NITROGENO TOTAL

(METODO DE KJELDAHL MODIFICADO PARA MUESTRAS QUE NO CONTENGAN NITRATOS)

6(A).1.-PRINCIPIO

TRANSFORMAR EL NITROGENO ORGANICO EN SULFATO AMONICO, POR EBULLICION CON ACIDO SULFURICO, CONCENTRADO Y SEPARAR POR DESTILACION EL CONJUNTO DE NITROGENO AMONIACAL ASI FORMADO Y EL QUE EVENTUALMENTE PUDIERA EXISTIR EN LA MUESTRA, RECOGIENDOLO EN UN EXCESO DE ACIDO VALORADO. EL EXCESO DE ACIDO SE DETERMINA POR RETORNO CON UN ALCALI VALORADO EN PRESENCIA DE ROJO DE METILO

ES APLICABLE A TODOS LOS ABONOS QUE NO CONTENGAN NITRATO

6(A).2.-MATERIAL Y APARATOS

6(A).2.1.-MATRACES KJELDAHL DE 500 A 800 ML

6(A).2.2.- APARATOS DE DESTILACION

6(A).2.3.-VASOS DE 300 ML

6(A).2.4.-BURETAS DE 25 ML

6(A)2.5.-PROBETAS DE 25 Y 200 ML

6(A).3.-REACTIVOS

6(A).3.1 .-OXIDO DE MERCURIO O MERCURIO METALICO, EXENTO DE N

6(A).3.2.-SULFATO POTASICO O SODICO ANHIDRO, EXENTO DE N

6(A).3.3.-ACIDO SULFURICO DE 93 A 98 POR 100, EXENTO DE N

6(A).3.4.-DISOLUCION DE TIOSULFATO SODICO O DE SULFURO SODICO: 80 G DE S2O3NA2. 5H2O EN 1 LITRO DE AGUA O 40 G DE SULFURO SODICO EN 1 LITRO DE AGUA.

6(A).3.5.-HIDROXIDO SODICO O EN DISOLUCION: 450 G DE NAOH EN AGUA, ENFRIAR Y ENRASAR A 1 LITRO. DEBE TENER DE DENSIDAD 1,36 O MAS

6(A).3.6.-REGULADOR DE EBULLICION INERTE

6(A).3.7.-ROJO DE METILO: DISOLVER 1 G EN 2000 ML DE ALCOHOL

6(A ).3.8.-DISOLUCION DE ACIDO SULFURICO O CLORHIDRICO N/2 O N/10 SI LA CANTIDAD DE N ES PEQUEÑA

6(A).3.9.-DISOLUCION DE SOSA N/2 O N/10

METODOS DE ANALISIS DE FERTILIZANTES

6(A).4.-PROCEDIMIENTO

6(A).4.1 .-PESAR DE 0,7 A 2,2 G DEL ABONO Y PONERLOS EN UN MATRAZ KJELDEHL . AÑADIR 0,7 G DE OXIDO MERCURICO O 0,65 G DE MERCURIO METALICO, 15 G DE SULFATO POTASICO O SODICO ANHIDRO Y 25 ML DE SULFURICO CONCENTRADO . SI FUERA NECESARIO PESAR MAS DE 2,2 G, AÑADIR 10 ML DE SULFURICO POR CADA GRAMO DE MUESTRA

COLOCAR EL MATRAZ EN POSICION INCLINADA Y CALENTAR SUAVEMENTE HASTA QUE CESE LA FORMACION DE ESPUMA (PARA REDUCIR ESTA PUEDE AÑADIRSE UNA PEQUEÑA CANTIDAD DE PARAFINA). HERVIR VIVAMENTE HASTA QUE LA SOLUCION SE ACLARE Y LUEGO, POR LO MENOS, OTROS TREINTA MINUTOS MAS (DOS HORAS PARA LAS MUESTRAS QUE CONTENGAN MATERIA ORGANICA)

6(A).4.2.-ENFRIAR, AÑADIR CON PRECAUCION UNOS 200 ML DE AGUA, VOLVER A ENFRIAR POR DEBAJO DE 25 GRADOS C, AÑADIR 25 ML DE DISOLUCION DE TIOSULFATO Y MEZCLAR PARA PRECIPITAR EL HG. AÑADIR EL REGULADOR DE EBULLICION INERTE PARA EVITAR VAPORACION SUBITA. INCLINAR EL MATRAZ Y AÑADIR SIN AGITAR LA SOSA (25 G SOLIDOS O SUFICIENTE DISOLUCION PARA PONER LA REACCION MUY ALCALINA). LA DISOLUCION DE TIOSULFATO O SULFURO SE PUEDE MEZCLAR CON LA DISOLUCIN DE SOSA ANTES DE AÑADIRLA AL MATRAZ

6(A).4.3.-INMEDIATAMENTE CONECTAR EL MATRAZ AL BULBO SUMERGIDO EL EXTREMO DE LA ALARGADERA EN UN VASO QUE CONTIENE EL ACIDO N/2 O N/10 EXACTAMENTE MEDIDOS Y CINCO A SIETE GOTAS DEL INDICADOR. AGITAR EL MATRAZ PARA MEZCLAR EL CONTENIDO Y CALENTAR HASTA QUE DESTILE TODO EL AMONIACO (A MENOS 150 ML DE DESTILADO)

6(A).4.4.-VALORAR EL EXCESO DE ACIDO CON SOSA DE LA MISMA NORMALIDAD

HACER UN ENSAYO EN BLANCO

6(A).5.5.-CALCULO

(FORMULA OMITIDA)

6(A).6.-OBSERVACIONES

6(A).6.1.-EL DISPOSITIVO DE CALENTAMIENTO SE AJUSTA DE TAL FORMA QUE SEA CAPAZ DE LLVAR 250 ML DE AGUA A 25 GRADOS C A EBULLICION FUERTE EN UNOS CINCO MINUTOS O EL TIEMPO QUE ESPCIFIQUE EL METODO. PARA PROBAR LOS CALENTADORES SE PRECALIENTAN DIEZ MINUTOS SI SON DE GAS O TREINTA MINUTOS SI SON ELECTRICOS. AGREGAR REGULADOR DE EBULLICION INERTE PARA EVITAR SOBRECALENTAMIENTO

6(A).6.2 .-DILUIR EL LIQUIDO QUE QUEDA EN LOS MATRACES KJELDAHL CON AGUA 1 + 1, SEPARANDO POR FILTRACION LAS SALES DE HG INSOLUBLES QUE SE RESERVA EN UN RECIPIENTE APROPIADO, PARA IMPEDIR LA CONTAMINACIN DEL MEDIO

6(A).6.3.-EN AUSENCIA DE MATERIA ORGANICA PUEDE SUSTITUIRSE LA MEZCLA OXIDO DE MERCURIO-SULFATO POTASICO POR LA E SELENIO, SULFATO DE COBRE , SULFATO POTASICO (1:1:20) EN LA PROPORCION DE 1 G POR CADA 0,5 DE MUESTRA, NO SIENDO NECESARIO EN ESTE CASO UTILIZAR LA DISOLUCION DE TIOSULFATO SODICO O SULFURO SODICO JUNTO A LA DISOLUCION DE HIDROXIDO SODICO, EN LA ETAPA DE DESTILACION

6(A).7.-REFERENCIA

1.-ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL HEMISTS. OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS, ED. 1975, PAG. 15/2049

6(B).-NITROGENO TOTAL

(METODO KJELDEAHL MODIFICADO PARA MUESTRAS QUE CONTIENEN NITRATOS)

6(B).1.-PRINCIPIO

EL NITRATO NITRA EL ACIDO SALICILICO EN PRESENCIA DE ACIDO SULFURICO CONCENTRADO . POSTERIORMENTE EL NITRATO DEL DERIVADO NITRADO SE REDUCE POR EL ZN O EL TIOSULFATO Y SE PROSIGUE COMO EN EL KJELDAHL PARA MUESTRAS QUE NO CONTENGAN NITRATOS

NO ES APLICABLE A ABONOS QUE TENGAN ALTA RELACION CL-/NO3- NI A LOS ABONOS LIQUIDOS EN GENERAL

6(B).2.-MATERIAL Y APARATOS

COMO EN 6(A).2

6(B).3.-REACTIVOS

6(B).3.1.-ACIDO SALICILICO

6(B).3.2.-POLVO DE ZINC IMPALPABLE

6(B).3.3.-EL RESTO COMO EN 6(A).3

6(B).4.-PROCEDIMIENTO

6(B).4.1.-COLOCAR DE 0,7 A 2,2 G DE MUESTRA EN EL MATRAZ DE DIGESTION Y AÑADIR 40 ML DE ACIDO SULFURICO QUE CONTENGA 2 G DE ACIDO SALICILICO. AGITAR HASTA MEZCLARLO COMPLETAMENTE Y DEJAR EN REPOSO AGITANDOLO DE CUANDO EN CUANDO DURANTE TREINTA MINUTOS O MAS

6(B).4.2.-AÑADIR 5 G DE S2O3NA2 . 5H2O O 2 G DE ZN EN POLVO. AGITAR Y DEJAR EN REPOSO CINCO MINUTOS. CALENTAR EN LLAMA PEQUEÑA HASTA QUE CESE LA FORMACION DE ESPUMA. RETIRAR DEL FUEGO, AÑADIR 0,7 G DE HGO O 0,65 G DE HG METALICO Y 15 G DE SULFATO POTASICO O SODICO ANHIDRO. HERVIR VIVAMENTE HASTA QUE SE ACLARE LA DISOLUCION Y LUEGO TREINTA MINUTOS MAS POR LO MENOS (DOS HORAS SI LA MUESTRA CONTIENE MATERIA ORGANICA)

6(B).4.3.-CONTINUAR HASTA EL FINAL COMO EN 6(A).4.2. Y SIGUIENTES

6(B). 5.-REFERENCIA

1.-ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMIST. OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS. ED. 1975, PAG. 16/2.050

6(C).-NITROGENO TOTAL

6(C).1.-PRINCIPIO

LA REDUCCION DEL NITROGENO NITRICO A AMONIACAL SE HACE POR EL CROMO EN POLVO, PROSIGUIENDOSE COMO EN EL JKELDAHL PARA MUESTRAS SIN NITRATOS

6(C).2.-MATERIAL Y APARATOS

COMO EN 6(A).2

6(C).3.-REACTIVOS

6(C).3.1.-CROMO METAL EN POLVO QUE PASE POR UN TAMIZ DE 100 MALAS (0,149 MILIMETROS), EXENTO DE N

6(C).3.2.-ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO (D=1,18)

6(C).3.3.-ACIDO SULFURICO DILUIDO. SE AGREGAN LENTAMENTE 625 ML DE CIDO SULFURICO A 300 ML DE GUA. DILUIR A CASI UN LITRO CON AGUA Y AGITAR. ENRASAR CUANDO SE ENFRIA. EVITAR PRESENCIA DE AMONIACO EN LA ATMOSFERA

6(C).3.4.-DISOLUCION DE TIOSULFATO SODICO O DE SULFATO POTASICO: 160 G DE S2O3NA25H2O DISOLVER EN AGUA Y ENRASAR A UN LITRO, O 30 G DE SK2 EN UN LITRO DE AGUA

6(C).3.5.-EL RESTO COMO EN 6(A).3

6(C).4. -PROCEDIMIENTO

6(C).4.1.-PESAR DE 0,2 A 2 G DE LA MUESTRA (QUE CONTENGA UNA CANTIDAD IGUAL O MENOR DE 60 MG DE N NITRICO), PONERLOS EN UN KJELDAHL DE 500 A 800 ML Y AGREGAR 1,2 G DE POLVO DE CROMO. AGREGAR 35 ML DE AGUA, O SI EL PROBLEMA ES LIQUIDO, COMPLETAR HASTA FORMAR UN VOLUMEN TOTAL DE 35 ML. DEJAR EN REPOSO DURANTE DIEZ MINUTOS AGITANDO EN CIRCULO DE CUANDO EN CUANDO SUAVEMENTE PARA DISOLVER TODOS LOS NITRADOS. AGREGAR 5 ML DE ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO Y DEJAR EN REPOSO UN TIEMPO QUE NO DEBE SER INFERIOR A TRENTA SEGUNDOS NI SUPERIOR A DIEZ MINUTOS

6(C).4.2.-PONER EL MATRAZ EN UN DISPOSITIVO DE CALENTAMIENTO QUE CUMPLA 6(A).6.1. EN SIETE O SIETE MINUTOS Y MEDIO. DESPUES DE CALENTAR TRES MINUTOS Y MEDIO, SEPARAR EL CALOR Y DEJAR ENFRIAR. AGREGAR 22 G DE SULFATO POTASICO, 1 G DE OXIDO DE MERCURIO Y EL REGULADOR DE EBULLICION INERTE. AÑADIR 40 ML DE ACIDO SULFURICO DILUIDO O 25 ML DE ACIDO SULFURICO CONCENTRADO. SI LA MATERIA ORGANICA QUE CONSUME GRAN CANTIDAD DE ACIDO, EXCEDE DE 1 G, AGREGAR ADICIONALMENTE 1 ML DE ACIDO SULFURICO CONCENTRADO POR CADA 0,1 G DE MATERIA ORGANICA EN EXCESO

6(C).4.3.-COLOCAR EL MATRAZ EN EL DISPOSITIVO DE CALENTAMIENTO QUE CUMPLA 6(A).691. EN CINCO MINUTOS. DISMINUIR EL CALOR SI LA ESPUMA OCUPA UNA ZONA IGUAL O MAYOR DE 2/3 DEL BULBO DEL MATRAZ. CALENTAR DURANTE CINCO MINUTOS HASTA QUE DESAPAREZCAN LOS HUMOS BLANCOS. PARA MUESTRAS QUE CONTENGAN MATERIA ORGANICA, AGITAR SUAVEMENTE, POR ROTACION Y PROSEGUIR LA DIGESTION DURANTE SESENTA MINUTOS MAS

6(C).4.4.-CONTINUAR HASTA EL FINAL COMO EN 6(A).4.2. Y SIGUIENTES

6(C).5.-REFERENCIAS

1.-ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS . OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS. ED. 1975, PAG. 16/2.051

7(A).-NITROGENO AMONIACAL

(METODO DEL OXIDO DE MAGNESIO)

7(A).1.-PRINCIPIO

TRANSFORMACION DEL NITROGENO AMONIACAL EN AMONIACO POR LA ACCION DE OXIDO DE MAGNESIO (NO CARBONATADO). DESTILAR EL AMONIACO SOBRE UN VOLUMEN CONOCIDO DE ACIDO SULFURICO Y VALORAR EL EXCESO DE ACIDO POR RETORNO CON HIDROXIDO SODICO EN PRESENCIA DE ROJO DE METILO

APLICABLE A TODOS LOS ABONOS , INCLUSO LOS COMPUESTOS, EN LOS CUALES EL NITROGENO SE ENCUENTRE SOLO COMO SAL AMONICA O MEZCLA CON NITRATOS

NO ES APLICABLE A LOS ABONOS QUE CONTENGA UREA, CIANAMIDA Y OTROS COMPUESTOS ORGANICOS NITROGENADOS

7(A).2.-MATERIAL Y APARATOS

COMO EN 6(A).2. EXCEPTO MATRAZ KJELDAHL

7(A).3.-REACTIVOS

7(A).3.1.-OXIDO DE MAGNESIO (LIBRE DE CARBONATO MAGNESICO)

7(A).3.2.-HIDROXIDO SODICO N/2

7(A).3.3.- ACIDO SULFURICO N/2

7(A).3.4.-INDICADOR ROJO DE METILO: DISOLVER 1 G EN 100 ML DE ETANOL

7(A).4.-PROCEDIMIENTO

PESAR, CON PRECISION DE UN MG, DE 0,7 A 3,5 G DE LA MUESTRA, SEGUN EL CONTENIDO DE NITROGENO AMONIACAL. INTRODUCIR EN UN MATRAZ DE DESTILACION, AÑADIENDO UNOS 200 ML DE AGUA Y 2 G O MAS DE OXIDO DE MAGNESIO. CONECTAR EL MATRAZ A UN REFRIGERANTE MEDIANTE UN BULBO DE SEGURIDAD

DESTILAR UNOS 100 ML DE LIQUIDO Y RECOGER EN UN VASO CONTENIENDO UNOS 30 ML DE ACIDO SULFURICO N/2 Y UNAS GOTAS DE ROJO DE METILO. VALORAR EL EXCESO DE ACIDO SULFURICO N/2 MEDIANTE HIDROXIDO SODICO N/2. HACER UN ENSAYO EN BLANCO

7(A).5.-CALCULO

COMO EN 6(A).5

7(A).6.-REFERENCIA

1.ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS. ED . 1980, PAG. 17/2.065

7(B).-NITROGENO AMONIACAL

(METODO DE FORMALDEHIDO )

7(B).1.-PRINCIPIO

EL CATION AMONIO REACCIONA CON EL FORMOL ORIGINANDO UROTROPINA Y DEJANDO EN LIBERTAD LOS ACIDOS DE LA SAL, QUE SE VALORAN

ES NECESARIO QUE LA DISOLUCION DE LA MUESTRA SEA NEUTRA RESPECTO AL ROJO DE METILO Y QUE NO EXISTAN MATERIAS SOLIDAS QUE PUEDAN REACCIONAR CON LOS ACIDOS LIBERADOS

ES APLICABLE AL NITRATO AMONICO Y AL SULFATO AMONICO. PUEDE UTILIZARSE EN PRESENCIA DE UREA

7(B).2.-MATERIAL Y APARATOS

7(B).2.1.-MATRACES AFORADOS DE 250 A 500 ML

7(B).2.2.-VASOS DE 300 ML

7(B).2.3.-BURETAS DE 25 ML

7(B).2.4.-PROBETAS DE 200 ML

7(B).3.-REACTIVOS

7(B).3.1.-FORMALDEHIDO AL 37 POR 100

7(B).3.2. -HIDROXIDO SODICO N/2

7(B).3.3.-INDICADOR DE FENOLFTALEINA: DISOLVER 1 G DE FENOLFTALEINA EN 100 ML DE ETANOL

7(B).3.4.-INDICADOR ROJO DE METILO: DISOLVER 1 G DE ROJO DE METILO EN 100 ML DE ETANOL

7(B) .4.-PROCEDIMIENTO

7(B).4.1.-PESAR CON PRECISION DE UN MG, 7 O 14 G DE LA MUESTRA Y DILUIR A 250 ML O A 500 ML. TOMAR CON PIPETA 25 O 50 ML INRODUCIENDOLOS EN UN MATRAZ ERLENMEYER Y AÑADIR 1 ML DE FORMALDEHIDO POR CADA 0,1 G DE MUESTRA EN LA PORCION. DILUIR A UNOS 200 ML Y DEJAR EN REPOSO CINCO MINUTOS

7(B).4.2.-VALORAR CON UNA SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO N/2 EN PRESENCIA DE CINCO GOTAS DE FENOLFTALEINA

7(B).4.3.-HACER UN ENSAYO UTILIZANDO FORMALDEHIDO Y FENOLFTALEINA

7(B).4.4.-NEUTRALIZAR UNA PORCION DEL PROBLEMA CON HIDROXIDO SODICO N/2 EN PRESENCIA DEL ROJO DE METILO

7(B).5.-CALCULO

(FORMULA OMITIDA)

7(B).6.-OBSERVACIONES

ES NECESARIO NEUTRALIZAR EL FORMALDEHIDO Y EL PROBLEMA EN ALICUOTAS DISTINTAS A LAS DE LA DETERMINACION, AUNQUE IGUALES EN VOLUMEN, PARA EVITAR LA MEZCLA DE INDICADORES

7(B).7.-REFERENCIAS

1.-ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS. ED 1980, PAG. 17/2.066

8.-NITROGENO AMONIACAL Y NITRICO CONJUNTAMENTE

(METODO DE DEVARDA)

8.1.-PRINCIPIO

EL NITROGENO NITRICO SE REDUCE A AMONIACAL POR EL HIDROGENO DESPRENDIDO AL REACCIONAR LA ALEACION DE DEVARDA EN MEDIO FUERTEMENTE ALCALINO. DESTILAR EL AMONIACO FORMADO Y EL YA EXISTENTE EN LA DISOLUCION, RECOGIENDOLO EN UN EXCESO DE ACIDO Y VALORANDO POR RETORNO

ES APLICABLE A LOS ABONOS EN QUE SE EXIJA EL NITROGENO NITRICO Y AMONIACAL, PERO NO ES APLICABLE EN PRESENCIA DE MATERIA ORGANICA, CIANIMIDA DE CALCIO Y UREA

8.2.-MATERIAL Y APARATOS

COMO EN 6(A).2., EXCEPTO EL MATRAZ KJELDAHL

8.3.-REACTIVOS

8.3.1 .-ALEACION DE DEVARDA (AL-CU-ZN, 45/50/8)

8.3.2.-DISOLUCION CONCENTRADA DE HIDROXIDO SODICO (42 POR 100 EN PESO)

8.3.3.-DISOLUCION DE ACIDO SULFURICO N/2

8.3.4.-DISOLUCION DE HIDROXIDO SODICO N/2

8.3.5.-INDICADOR DE ROJO DE METILO: DISOLVER 1 G EN 100 ML DE ETANOL

8.4.-PROCEDIMIENTO

8.4.1.-PESAR, CON PRECISION DE 1 MG, DE 0,35 A 0,5 DE MUESTRA Y PONERLOS EN UN MATRAZ DE 600 A 700 ML. AÑADIR 300 ML DE AGUA, 3 G DE ALEACION DE DEVARDA Y 5 ML DE LA DISOLUCION CONCENTRADA DE SOSA , DESPACIO Y POR LAS PAREDES PARA QUE NO SE MEZCLE CON EL RESTO

8.4.2. .-CONECTAR CON EL APARATO DE DESTILACION, TENIENDO INTRODUCIDO EL EXTREMO DE LA ALARGADRA EN UN VASO QUE CONTIENE 30 ML DE ACIDO SULFURICO N/2. AGITAR EL MATRAZ Y CALENTAR SUAVEMENTE AL PRINCIPIO Y LUEGO EN UNA PROPORCION QUE PRODUZCA 250 ML DE DESTILADO EN UNA HORA

8.4.3. .-UNA VEZ DESTILADO TODO EL AMONIACO VALORAR EL EXCESO DE ACIDO SULFURICO N/2 CON SOSA N/2 EN PRESENCIA DE ROJO DE METILO. HACER UN ENSAYO EN BLANCO

8.5.-CALCULO

COMO EN 6(A).5

8.6.-OBSERVACIONES

SI SE DESEA CONOCER SEPARADAMENTE EL NITROGENO NITRICO UNA VEZ DETERMINADOS LOS DOS JUNTOS, DETERMINAR EL NITROGENO AMONIACAL POR EL METODO DEL OXIDO DE MAGNESIO Y LA DIFERENCIA SERA EL NITROGENO NITRICO

8.7.-REFERENCIA

1.-ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS ED. 1980, PAG. 17/2.067

ANEXO V.-FITOSANITARIOS

4(A). DIMETOATO (POR ULTRAVIOLETA)

4(A).1.-PRINCIPIO

MEDIANTE CROMATOGRAFIA EN CAPA FNA Y VISUALIZACION A LA LUZ UV. SE SEPARA EL DIMETOATO DE SUS IMPUREZAS Y PRODUCTOS DE DEGRADACION. MECANICAMENTE SE RECOGE LA ZONA DEL DIMETOATO Y SE DETERMINA SU CONTENIDO POR BROMOMETRIA

APLICABLE TANTO AL DIMETOATO COMO A SU FORMULACIONES EN FORMA DE LIQUIDOS EMULSIONABLES Y POLVOS MOJABLES

4(A).2.-MATERIAL Y APARATOS

4(A).2.1.-EQUIPO PARA CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

4(A).2.2.-LAMPARA DE LUZ ULTRAVIOLETA CAPAZ DE EFECTUAR LECTURAS A 254 NM

4(A).2.3. -ROTAVAPOR

4(A).2.4.-EXTRACTOR SOXHLET DE 260 ML DE CAPACIDAD

4(A).2.5.-BAÑO DE AGUA

4(A).3.-REACTIVOS

4(A).3.1.-PLACAS DE SILICAGEL 60F 254, DE 0,25 MM DE ESPESOR. LAS PLACAS DEBEN LAVARSE, ANTES DE SU USO, POR DESARROLLO, EN LA MISMA DIRECCION EN QUE DESPUES SE UTILIZARAN, CON LA MEZCLA CLOROFORMO METANOL

4(A).3.2.-CLOROFORMO/METANOL 30/1 (V/V)

4(A).3.3.-SOLUCION BROMURO/BROMATO POTASICO 0,1 N

4(A).3.4.-ACIDO SULFURICO 2,5N

4(A).3.5.-IODURO POTASICO

4(A).3.6 .-SOLUCION DE MOLIBDATO AMONICO AL 5 POR 100

4(A).3.7.-SOLUCION DE TIOSULFATO SODICO 0,1N

4(A).3.8.-CLOROFORMO

4(A).3.9.-INDICADOR DE ENGRUDO DE ALMIDON

4(A).4.-PROCEDIMIENTO

4(A).4.1.-PREPARACION DE LA MUESTRA

4(A).4.1.1.-PRODUCTO TECNICO

PESAR, CON APROXIMACION DE LA DECIMA DE MG, 4 G DE PRODUCTO TECNICO, DISOLVER EN CLOROFORMO EN MATRAZ AFORAZO DE 10 ML Y LLEVAR A VOLUMEN CON EL MISMO DISOLVENTE

4(A).4.1.2.-LIQUIDOS EMULSIONABLES

NO NECESITAN PREPARACION ESPECIAL , APLICANDOSE DIRECTAMENTE SOBRE LA PLACA LA CANTIDAD DE MUESTRA NECESARIA

4(A).4.1.3.-POLVOS MOJABLES

PESAR, CON APROXIMACION DE LA DECIMA DE MG, LA CANTIDAD DE MUESTRA NECESARIA PAR OBTENER 4 G DE PRINCIPIO ACTIVO, INTRODUCIRLA EN UN CARTUCHO DE EXTRACCION Y SEGUIDAMENTE EXTRAER EN SOXHLET CON CLOROFORMO DURANTE EL TIEMPO NECESARIO PARA LOGRAR EL AGOTAMIENTO DE LA MUESTRA (APROXIMADAMENTE DOS O TRES HORAS). TERMINADA LA EXTRACCION CONCENTRAR LA SOLUCION EN ROTAVAPOR (A UNA TEMPERATURA DE 50-60 GRADOS C) HASTA QUE QUEDEN SOLAMENTE 1 O 2 ML, RECOGER EL CONTENIDO DEL MATRAZ DE EVAPORACION TRASVASANDOLO A UN MATRAZ AFORADO DE 10 ML, AYUDANDOSE PARA UNA RECUPERACION CUANTITATIVA CON PEQUEÑAS PORCIONES DE CLOROFORMO (REALIZAR UN MINIMO DE 3 LAVADOS) Y FINALMENTE ENRASAR CON EL MISMO DISOLVENTE

4(A).4.2 .-SEPARACION CROMATOGRAFICA

APLICAR SOBRE LA PLACA CROMATOGRAFICA , A LO LARGO DE UNA LINEA DE 14 CM SITUADA A 2 CM DEL BORDE INFERIOR Y A 3 CM DE CADA BORDE LATERAL, UN VOLUMEN DE SOLUCION QUE CONTENGA UNOS 20 MG, DE SUSTANCIA ACTIVA

EVAPORAR EL DISOLVENTE Y DESARROLLAR LA PLACA, UNA VEZ, CON LA MEZCLA CLOROFORMO/METAOL 30/1 V/V. EVAPORAR EL DISLENTE Y EXAMINAR LA PLACA O LA LUZ U.V., MARCANDO LA ZONA CORRESPONDIENTE A DIMETOATO (NORMALMENTE LA MANCHA PRINCIPAL)

SEPARAR MECANICAMENTE , CON AYUDA DE UNA ESPATULA, LA ZONA DE LA CAPA DE SILICAGEL QUE CONTIENE EL DIMETOATO, ASI COMO LA FRANJA DE 5 MM QUE LA RODEA, CON EL FIN DE ASEGURARSE DE QUE LA SEPARACION ES CUANTITATIVA, PASANDOSE A UN FRASCO DE IODO DE 500 ML O EN SU DEFECTO A UN ERLENMEYER DEL MISMO VOLUMEN CON TAPON ESMERILADO

4(A).4.3.-VALORACION BROMOMETRICA

INTRODUCIR EN EL FRASCO DE IODO ERLENMEYER UN TUBO CONTENIENDO 0,5 G DE IODURO POTASICO, AÑADIR 25 ML DE SOLUCION 0,1N DE BROMURO BROMATO Y 25 ML DE ACIDO SULFURICO 2,5N. TAPAR EL MATRAZ, MOJANDO PREVIAMENTE EL TAPON EN AGUA DESTILADA Y DEJAR 30 MINUTOS A 20 GRADOS C AGITANDO DE VEZ EN CUANDO. AL CABO DE ESTE TIEMPO INVERTIR EL MATRAZ PARA QUE EL IODURO POTASICO ENTRE EN CONTACTO CON LA SOLUCION Y A CONTINUACION AÑADIR 1 ML DE SOLUCION DE MOLIBDATO AMONICO AL 5 POR 100 Y VALORAR LA MEZCLA CON LA SOLUCION 0,1N DE TIOSULFATO SODICO, USANDO ENGRUDO DE ALMIDON COMO INDICADOR

HACER UN ENSAYO EN BLANCO, CON LAS MISMAS CANTIDADES DE REACTIVOS Y TOMANDO UNA CANTIDAD DE SILICAGEL PARECIDA A LA DEL ANALISIS Y DE LA MISMA ZONA

4(A).5.-CALCULOS

(FORMULA OMITIDA)

4(B).-DIMETOATO (POR INFRARROJO)

4(B).1.-PRINCIPIO

MEDIANTE ESPECTROFOTOMETRIA INFRARROJA SE DETERMINA EL CONTENIDO EN DIMETOATO CUANTIFICADO LA BANDA DE ABSORCION QUE PRESENTA ESTE COMPUESTO ENTRE 1.66 Y 1.800 CM-1

APLICABLE A FORMULACIONES EN FORMA DE POLVOS ESPOLVOREABLES

4(B) .2.- MATERIAL Y APARATOS

4(B).2.1.-ESPECTROFOTOMETRO DE INFRARROJOS

4(B).2.2.-CUBETAS DE BRK DE 0,05 MM DE ESPESOR

4(B).2.3.-EXTRACTOR SOXHLET DE 250 ML DE CAPACIDAD

4(B).2.4.-ROTAVAPOR

4(B).2.5.-BAÑO DE AGUA

4(B).2.6.-MATRACES AFORADOS DE 25 ML

4(B).3.-REACTIVOS

4(B) .3.1.-CLORURO DE METILENO

4(B).3.2.-DIMETOATO PATRON DE RIQUEZA CONOCIDA

4(B).4.-PROCEDIMIENTO

4(B).4.1.-PREPARACION DE LA SOLUCION PATRON :

PESAR CON PRECISION DE 0,1 MG, APROXIMADAMENTE DE DIMETOATO PATRON E INTRODUCIRLOS EN EL MATRAZ AFORADO DE 25 ML, DISOLVIENDOLOS Y ENRASANDO POSTERIORMENTE CON CLORURO DE METILENO

4(B).4.2.-PREPARACION DE LA SOLUCION DE LA MUESTRA A ANALIZAR

PESAR CON PRECISION DE 0,1 MG, LA CANTIDAD DE MUESTRA NECESARIA PARA TENER APROXIMADAMENTE 200 MG DE DIMETOATO, INTRODUCIRLA EN UN CARTUCHO DE EXTRACCION Y SEGUIDAMENTE EXTRAER EN UN SOXHLET CON CLORURO DE METILENO DURANTE EL TIEMPO NECESARIO PARA LOGRAR EL AGOTAMIENTO DE LA MUESTRA (APROXIMADAMENTE UNA HORA ). TERMINADA LA EXTRACCION CONCENTRAR LA SOLUCION EN ROTAVAPOR (A UNA TEMPERATURA DE 30-40 GRADOS C) HASTA QUE QUEDEN APROXIMADAMENTE 5 ML, AYUDANDOSE PARA UNA RECUPERACION CUANTITATIVA CON PEQUEÑAS PORCIONES DE CLORURO DE METILENO (REALIZAR UN MINIMO DE 3 LAVADOS ) Y FINALMENTE ENRASAR CON EL MISMO DISOLVENTE

4(B).4.3.-DETERMINACION ESPECTROFOTOMETRICA

EN UN ESPECTROFOTOMETRO DE INFRARROJOS Y UTILIZANDO CUBETAS DE BRK DE 0,05 MM DE ESPESOR REALIZAR UN BARRIDO ENTRE 1.600 Y 1.800 CM-1 DE LAS SOLUCIONES DEL DIMETOATO PATRON Y DE LA MUESTRA PREPARADAS COMO SE DESCRIBE EN LOS APARTADOS A(B). 4.1. Y 4(B).4.2

4(B).5.-CALCULOS

(FORMULA OMITIDA)

14.-COBRE TOTAL (POR IODOMETRIA )

14.1.-PRINCIPIO

LOS IONES CUPRICOS, RESULTANTES DE LA MINERALIZACION DE LA MUESTRA CON MEZCLA SULFO-NITRICA, REACCIONAN CON YODURO POTASICO , PRODUCIENDO YODURO CUPROSO Y YODO. ESTE ULTIMO SE VALORA CON TIOSULFATO SODICO

APLICABLE A PRODUCTOS TECNICOS, FORMULADOS Y MEZCLAS CON DITIOCARBAMATO

14.2.-MATERIAL Y APARATOS

14.2.1.-MATERIAL DE VIDRIO DE USO CORRIENTE EN EL LABORATORIO

14.2.2.-PLACA CALEFACTORA

14.3.-REACTIVOS

14.3.1 .-ACIDO ACETICO GLACIAL

14.3.2.-ACIDO NITRICO, DENSIDAD 1,42

14.3.3 .-ACIDO SULFURICO, DENSIDAD 1,84

14.3.4.-ENGRUDO DE ALMIDON. TRITURAR 2 G DE ALMIDON CON UNOS 10 ML DE AGUA FRIA, HASTA FORMAR UNA PASTA HOMOGENEA, QUE SE AÑADIRA CON AGITACION CONSTANTE, A SUFICIENTE AGUA HIRVIENDO PARA ALCANZAR 200 ML, CONTINUAR LA EBULLICION DURANTE UNOS MINUTOS MAS, ENFRIAR Y FILTRAR SI FUESE NECESARIO

14.3.5.-FLUORURO SODICO, DISOLUCION SATURADA, APROXIMADAMENTE 48 G/L EN FRASCO DE POLIETILENO

14.3.6.-PAPEL INDICADOR DE PH

14.3.7

PIEDRA POMEZ (GRANULOS )

14.3.8.-TIOCIANATO POTASICO, DISOLUCION 400 G/L

14.3.9.-TIOSULFATO SODICO 0,1N, DISOLUCION EXACTAMENTE VALORADA. PESAR ALREDEDOR DE 25 G DE TIOSULFATO SOLIDO CRISTALIZADO (S2O3NA2 . 5H2O), DISOLVER EN UNA PEQUEÑA CANTIDAD DE AGUA FRIA RECIEN HERVIDA. DILUIR A UN LITRO Y ALMACENAR EN FRASCOS DE VIDRIO. DEJAR ENVEJECER DURANTE UNOS QUINCE DIAS Y SIFONAR O PASAR A TRAVES DE PLACA FILTRANTE. GUARDAR EN FRASCOS DE VIDRIO DE COLOR TOPACIO. LA NORMALIDAD EXACTA DE LA DISOLUCION

DEBERA DETERMINARSE PASANDO CON EXACTITUD A LA DECIMA DE MG, APROXIMADAMENTE 0,15 G DE COBRE ELECTROLITICO DE MAXIMA PUREZA Y SIGUENDO EL PROCEDIMIENTO QUE SE INDICA EN 14.4.LOS CALCULOS SE HARAN TENIENDO PRESENTE LA SIGUIENTE FORMULA:

(FORMULA OMITIDA)

14.3.10.-UREA

14.3.11.-YODURO POTASICO, LIBRE DE YODATO, DISOLUCION 400 G/L

14.4.-PROCEDIMIENTO

PESAR CON PRECISION DE LA DECIMA DE MILIGRAMO UNA MUESTRA QUE CONTENGA APROXIMADAMENTE 0,15 G DE COBRE METAL E INTRODUCIRLA EN UN MATRAZ ERLENMEYER DE 250 ML

ADICIONAR, CON PROBETA , 10 ML DE ACIDO NITRICO Y 10 ML DE ACIDO SULFURICO Y UNA PEQUEÑA CANTIDAD DE GRANULOS DE PIEDRA POMEZ. CALENTAR A EBULLICION EL ERLENMEYER SOBRE LA PLACA CALEFACTORA, HASTA LA DESAPARICION DE LOS GASES DE COLOR PARDO Y EL DESPRENDIMIENTO DE VAPORES BLANCOS DENSOS. LA SOLUCION RESULTANTE DEBERA SER DE COLOR VERDE-AZULADO CON SEDIMENTO BLANCO

SI FUESE NECESARIO REPETIR LA ADICION DE ACIDO NITRICO, AÑADIR 5 ML Y CONTINUAR LA CALEFACCION

RETIRAR EL ERLENMEYER DE LA PLACA CALEFACTORA Y DEJARLO ENFRIAR A TEMPERATURA AMBIENTE

ADICIONAR CUIDADOSAMENTE POCO A POCO 50 ML DE AGUA DESTILADA Y CALENTAR A EBULLICION SOBRE LA PLACA CALEFACTORA DURANTE DIEZ MINUTOS, AGREGAR 0,5 G. DE UREA, PROLONGANDO LA EBULLICION CINCO MINUTOS.

RETIRAR EL ERLENMEYER DE LA PLACA CALEFACTORA Y DEJARLO ENFRIAR A TEMPERATURA AMBIENTE.

AÑADIR, CON PIPETA, AMONIACO AGITANDO LA DISOLUCION CONSTANTEMENTE HASTA QUE SE FORMA PRECIPITADO , PROSIGUIENDO LA ADICION DE AMONIACO GOTA A GOTA HASTA QUE EL PRECIPITADO SE DISUELVA Y LA DISOLUCION ADQUIERA UN COLOR AZUL OSCURO. DEJAR ENFRIAR A TEMPERATURA AMBIENTE. ADICIONAR CON PIPETA ACIDO ACETICO HASTA QUE LA SOLUCION TOME COLOR AZUL O AZUL VERDOSO Y TENGA CARACTER ACIDO AL PAPEL INDICADOR. ENTONCES AÑADIR CON PIPETA 2 ML DE ACIDO ACETICO. DEJAR ENFRIAR A TEMPERATURA AMBIENTE

ADICIONAR CON PIPETA 5 ML DE FLUORURO SODICO Y 10 ML DE YODURO POTASICO. TAPAR EL MATRAZ ERLENMEYER CON SU TAPON PREVIAMENTE HUMEDECIDO CON AGUA Y AGITAR SUAVEMENTE PARA FAVORECER LA MEZCLA

VALORAR CON TIOSULFATO SODICO HASTA QUE LA SOLUCION ADQUIERA UN COLOR AMARILLO PALIDO, AÑADIR CON PIPETA 2 ML DE ENGRUDO DE ALMIDON Y 5 ML DE TIOCIANATO POTASICO. AGITAR SUAVEMENTE Y CONTINUAR LA VALORACION HASTA LA DESAPARICION DEL COLOR AZUL

14.5.-CALCULOS

(FORMULA OMITIDA)

ANEXO VI.-LECHE

19.-SUSTANCIAS PROTEICAS PRODUCTORAS

19.1.-PRINCIPIO

DETERMINACION DE LAS SUSTANCIAS PROTEICAS REDUCTORAS DE LA LECHE, MEDIANTE REACCION CON FERRICIANURO POTASICO Y POSTERIOR VALORACION COLORIMETRICA. ESTE METODO ES APLICABLE A LA DETECCION DE LECHE EN POLVO RECONSTITUIDA EN LECHE CRUDA O PASTERIZADA

19.2.-MATERIAL Y APARATOS

19.2.1.-ESPECTROFOTOMETRO QUE PERMITE LECTURAS DE 610 NM CON CUBETAS DE 1 CM

19.2.2.-CENTRIFUGA 100-1500 R.P.M.

19.2.3.-TUBOS DE CENTRIFUGA GRADUADOS A 50 ML

19.2.4 .-BAÑO DE AGUA DE TEMPERATURA REGULABLE HASTA 80 GRADOS C

19.3.-REACTIVOS

19.3.1.-SOLUCION DE ACIDO ACETICO AL 5% DILUIR 50 ML DE ACIDO ACETICO GLACIAL CON AGUA DESTILADA A 1 LITRO

19.3.2.-SOLUCION SATURADA DE UREA EN AGUA DESTILADA

19.3.3.-SOLUCION TAMPON. DISOLVER 2 G DE NAOH EN AGUA Y DILUIR A 250 ML. DISOLVER 10,2 G DE FTALATO ACIDO DE POTASIO EN AGUA Y DILUIR A 250 ML. MEZCLAR 159 ML DE LA SOLUCION DE NAOH CON 200 ML DE LA SOLUCION FTALATO, DILUIRLO HASTA 800 ML Y AJUSTAR LA SOLUCION FINAL A UN PH 5,6 POR ADICION DE LAS SOLUCIONES DE NAOH O FTALATO

19.3.4.-SOLUCION DE FERRICIANURO POTASICO AL 1%. DISOLVER 10 G DE FERRICIANURO POTASICO EN AGUA DESTILADA Y DILUIR A 1 LITRO . DESECHAR LA SOLUCION SI PRESENTA COLOR VERDE O CONTIENE PRECIPITADO AZUL. ESTA SOLUCION DEBE UTILIZARSE RECIEN PREPARADA

19.3.5.-SOLUCION DE ACIDO TRICLOROACETICO AL 10%. DISOLVER 100G DE ACIDO TRICLOACETICO EN AGUA DESTILADA Y DILUIR A 1 LITRO

19.3.6.-SOLUCION DE FE CL3 . 6H2O AL 0,1%. DISOLVER 0,1 G DE FECL3.6H2O EN AGUA DESTILADA Y DILUIR A 100 ML. ESTA SOLUCION DEBE UTILIZARSE RECIEN PREPARADA

19.3.7.-SOLUCION DE FERROCIANURO POTASICO 0,05 MG/ML. PESAR 0,1147 G DE K4FECN6.3H2O Y DILUIR A 1 LITRO DE AGUA. DILUIR 50 ML DE ESTA SOLUCION A 100 ML EN MATRACES AFORADOS. CADA ML CONTIENE 0,05 MG DE FERROCIANURO ANHIDRO . DEBIDO A QUE ESTE REACTIVO SE OXIDA FACILMENTE CON EL AIRE SE DEBE UTILIZAR INMEDIATMENTE DESPUES DE SU PREPARACION

19.4.-PROCEDIMIENTO

19.4.1.-PREPARACION DE LA CURVA DE REFERENCIA

PIPETEAR 0; 0,5; 1,5 ;2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0 ML DE LA SOLUCION DE FERROCIANURO POTASICO (0,05 MG/ML) EN TUBOS DE ENSAYO. AÑADIR AGUA HASTA UN VOLUMEN TOTAL DE 5 ML. A TODOS LOS TUBOS SE LES AÑADE 5 ML DE LA <SOLUCION BLANCO > PREPARADA COMO SE DESCRIBE A CONTINUACION:

DILUIR 3 ML DE LA SOLUCION DE UREA A 15 ML CON AGUA EN UN TUBO DE CENTRIFUGA, AÑADIR 5 ML DE LA SOLUCION TAMPON, 5 ML DE LA SOLUCION DE FERRICIANURO Y 5 ML DE LA SOLUCION DE TRICLOROACETICO. MEZCLAR BIEN CON UNA VARILLA DE VIDRIO (LA <SOLUCION BLANCO> NO NECESITA SER CALENTADA, NI FILTRADA PARA LA CURVA DE REFERENCIA. SIN EMBARGO, CUANDO ANALIZAN LAS MUESTRAS , EL BLANCO SE CALIENTA Y SE FILTRA IGUAL QUE EN LAS CONDICIONES DEL ENSAYO)

A INTERVALOS CONVENIENTES AÑADIR 1 ML DE LA SOLUCION DE FECL3 AL 0,1%, PARA DESARROLLAR EL COLOR, AGITAR Y DEJAR EN REPOSO EXACTAMENTE DURANTE 10 MINUTOS. AJUSTAR EL 100% DE TRANSMITANCIA CON LA SOLUCION CONTROL (0,0 ML DE DISOLUCION K4FE (CN)6) A 610 NM . LEER A CONTINUACION EN TRANSMITANCIA LAS DISTINTAS PREPARACIONES DE LAS SOLUCIONES PATRONES Y REPRESENTAR LOS VALORES OBTENIDOS FRENTE A CONCENTRACIONES EN MG DE FERROCIANURO POTASICO EN PAPEL SEMILOGARITMICO

PREPARAR LA CURVA DE REFERENCIA CON CADA SERIE DE ANALISIS

19.4.2.-DETERMINACION

MANTENER LAS MUESTRAS APROXIMADAMENTE A 3 GRADOS C. LAS MUESTRAS CONGELADAS O CONSERVADAS SON INADECUADAS PARA LA DETERMINACION. PIPETEAR 15ML DE LA MUESTRA PREVIAMENTE HOMOGENEIZADA EN UN TUBO DE CENTRIFUGA GRADUADO DE 50 ML, QUE CONTENGA 15 ML DE AGUA. AÑADIR 3 ML DE LA SOLUCION DE ACIDO ACETICO AL 5%, AGITAR BIEN CON UNA VARILLA DE VIDRIO Y CENTRIFUGAR DURANTE 5 MINUTOS. DECANTAR EL LIQUIDO SOBRENADANTE .( UNA PEQUEÑA PARTE DEL PRECIPITADO PUEDE QUEDAR FLOTANDO EN LA PARTE SUPERIOR DEL TUBO DESPUES DE CENTRIFUGA; SI LA MAYOR PARTE DEL PRECIPITADO QUEDA EN EL FONDO DEL TUBO, SE PUEDE DESPRECIAR. SIN EMBARGO, SI LA MUESTRA CONTIENE EXCESIVA NATA, EL PRECIPITADO FLOTARA Y NO PODRA SEPARARSE EL SOBRENADANTE. DESECHAR LA DETERMINACION Y VOLVER A MEZCLAR LA MUESTRA COMPLETAMENTE. LAVAR EL PRECIPITADO DOS VECES CON PORCIONES DE 15 ML DE AGUA, MEZCLANDO CADA VEZ EL PRECIPITADO CON UNA VARILLA DE VIDRIO, CENTRIFUGAR 15 MINUTOS Y DECANTAR

AL PRECIPITADO Y A UN TUBO DE CENTRIFUGA LIMPIO QUE SE LLEVARA PARALELAMENTE COMO BLANCO, AÑADIR 3 ML DE SOLUCION DE UREA Y ENTONCES DILUIR A 15 ML CON AGUA. AGITAR, AÑADIR 5 ML DE LA SOLUCION TAMPON Y 5 ML DE LA SOLUCION DE FERRICIANURO POTASICO AL 1%,Y AGITAR DE NUEVO. COLOCAR EN UN BAÑO DE AGUA A 70 GRADOS C, EXACTAMENTE 20 MINUTOS Y ENFRIAR EN HIELO

UNA VEZ FRIO, AÑADIR 5 ML DE LA SOLUCION DE ACIDOTRICLOROACETICO AL 10%, AGITAR Y FILTRAR A TRAVES DE UN PAPEL WHATMAN N. 40 DE 11 CM O SIMILAR. USAR LOS PRIMEROS 5 ML DE FILTRADO PARA LAVAR LAS PAREDES Y EL FONDO DEL RECIPIENTE, DESECHANDOLOS. VERTER EL RESTO DE LA SOLUCION SOBRE EL FILTRO Y DEJAR QUE FILTRE COMPLETAMENTE; FILTRAR DE NUEVO SI EL FILTRADO ES TURBIO

INTRODUCIR 5 ML DE AGUA EN UN TUBO DE ENSAYO, AÑADIR 5 ML DEL FILTRADO CLARO. ADICIONAR 1 ML DE LA SOLUCION DE FECL3 AL 0,1% PARA QUE SE DESARROLLE EL COLOR AGITAR Y DEJAR EN REPOSO EXACTAMENTE 10 MINUTOS. AJUSTAR EL 100% DE TRANSMITANCIA A 610 NM CON EL BLANCO Y EFECTUAR LA LECTURA. CON LAS SERIES DE MUESTRAS, AÑADIR LA SOLUCION DE FECL3 A INTERVALOS CONVENIENTES PARA PERMITIR LAS LECTURAS DESPUES DEL PERIODO DE 10 MINUTOS

19.5.-CALCULO

A PARTIR DE LA CURVA DE REFERENCIA, DETERMINAR LA CANTIDAD DE SUSTANCIAS REDUCTORAS COMO MG K4FE (CN)6 POR 100 ML DE LECHE, MULTIPLICANDO EL VALOR OBTENIDO DE LA CURVA POR 40

19.6 .-OBSERVACIONES

LOS ANALISIS DEBEN TERMINARSE EL MISMO DIA QUE SE COMIENCEN. ES IMPORTANTE QUE LAS MUESTRAS NO PERMANEZCAN DEMASIADO TIEMPO DESPUES DE ENFRIAMIENTO O DESPUES DE LA FILTRACION. DURANTE LA DETERMINACION EL LABORATORIO DEBE ESTAR LIBRE DE VAPORES OXIDANTES O REDUCTORES (H2S, CL2, NHO3, ETC.)

19.7.-REFERENCIAS

1.-<OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS OF THE AOAC>.ED.1975.N.16.047-16.050

ANEXO VII -PIENSOS

13.-NITROGENO AMONIACAL

13.1.-PRINCIPIO

DESPLAZAMIENTO DEL NITROGENO EN MEDIO ALCALINO, MEDIANTE DESTILACION AL VACIO Y RECOGIDO EN DISOLUCION ACIDA

APLICABLE A HARINAS DE PESCADO Y CARNE

13.2.- MATERIAL Y APARATOS

13.2.1.-APARATO DE DESTILACION FORMADO POR:

13.2.1.1.-MATRAZ DE TRES BOCAS, DE UN LITRO DE CAPACIDAD Y BOCA ESMERILADA

13.2.1.2.-EMBUDO CON LLAVE DE PASO Y JUNTA ESMERILADA

13.2.1.3-ALARGADERA CON TRES ESMERILADOS

13.2.1.4.-TERMOMETRO DE MERCURIO GRADUADO DE 0 A 200 GRADOS C, CON ESMERILADO

13.2.1.5.-REFRIGERANTE

13.2.1.6. -GUIA PARA CAPILARES CON ESMERILADO

13.2.1.7.TRES MATRACES KITASATOS DE 500 ML DE CAPACIDAD

13.2.1.8.-PIEZA CON DOS ESMERILADOS, PROVISTA DE OLIVA LATERAL PARA ENTRADA DE GASES

13.2.1.9-ERLENMEYER DE 500 ML DE CAPACIDAD

13.2.1.10.-PIEZAS CON OLIVA ACODADA Y ESMERILADA

13.2.2.- BURETA DE 50 ML, GRADUADA EN DECIMAS

13.2.3.-EMBUDO DE VASTAGO LARGO

13.2.4.-VASOS DE PRECIPITADOS DE 250 ML DE CAPACIDAD

13.2.5.-BAÑO DE AGUA TERMOSTATIZADO

13.2.6.-BOMBA DE VACIO O SIMILAR

13.3.-REACTIVOS

13.3.1.-OXIDO DE MAGNESIO

13.3.2.-ANTIESPUMANTE TIPO SILICONA

13 .3.3.-ACIDO CLORHIDRICO 0,1N

13.3.4.-SOLUCION DE AZUL DE METILENO AL 0,24% EN ETANOL

13.3.5.SOLUCION DE ROJO DE METILO AL 0,02% EN ETANOL

13.3.6.-SOLUCION DE ACIDO BORICO AL 4%

13.3.7.-SOLUCION DE FENOLFATALEINA AL 0,5% EN ETANOL

13.3.8.-SOLUCION DE ACIDO SULFURICO AL 50% V/V

13.3.9.-INDICADOR: MEZCLAR A PARTES IGUALES, V/V LA SOLUCION 13.3.4 CON LA SOLUCION 13.3.5

13.4.-PROCEDIMIENTO

PESAR CON PRECISION DE MG ALREDEDOR DE 4 G.DE LA MUESTRA A ANALIZAR, PREVIAMENTE HOMOGENEIZADA Y MOLIDA, EN PARTICULAS NO SUPERIORES A 1 MM DE DIAMETRO. INTRODUCIR MEDIANTE EL EMBUDO 13.2.3. LA MUESTRA EN EL MATRAZ 13.2.1.1. AÑADIR 150 ML.DE AGUA DESTILADA, ARRASTRANDO CON ELLA LAS PARTICULAS DE MUESTRA QUE SE HUBIERAN ADHERIDO A LAS PAREDES DEL EMBUDO AÑADIR 4 GOTAS DE LA SOLUCION 13.3.7. Y 3 GORAS DE LA SOLUCION 13.3.2. AÑADIR A CADA UNO DE LOS KITASATOS 13.2.1.7. Y EL ERLENMEYER 13.2.1.9, 10 ML DE LA SOLUCION DE ACIDO BORICO 13.3.6, CON 3-4 GOTAS DEL INDICADOR 13.3.9. COLOCAR EN EL OTRO DE LOS TRES KITASATOS 13.2.1.7. ACIDO SULFURICO DILUIDO PARA ABSORBER EL AMONIACO DEL AIRE, HASTA ASEGURAR UN CIERRE HIDRAULICO

MONTAR EL APARATO DE DESTILACION, CONECTANDOLO A VACIO ABRIENDO LA LLAVE UNIDA AL KITASATO DONDE SE ADICIONE EL ACIDO SULFURICO DILUIDO, PROCURANDO UNA SUCCION SUAVE, PERO SUFICIENTE PARA OBTENER UN BARBOTEO DEL LIQUIDO OBTENIDO EN EL MATRAZ 13.2.1.1. Y CALENTAR EN BAÑO DE AGUA. SEGUIDAMENTE AÑADIR SOBRE LA MUESTRA CONTENIDA EN EL MATRAZ 13.2.1.1. 10 G. DE13.3.1. EN 100 ML DE AGUA HASTA QUE EL INDICADOR 13.3.9 VIRE DE COLOR, EN CASO DE NO VIRAR AÑADIR MAS CANTIDAD HASTA SU VIRAJE

ES IMPRESCINDIBLE EVITAR QUE DURANTE LAS ADICIONES DE OXIDO DE MAGNESIO EL EMBUDO 13.2.1.2. QUEDE EXENTO DE LIQUIDO PARA EVITAR LA PERDIDA DE AMONIACO

EL PROCESO DE CALENTAMIENTO EN BAÑO DE AGUA Y AL VACIO DEBEN EFECTUARSE DE TAL FORMA, QUE LA TEMPERATURA DE DESTILACION ESTE COMPRENDIDA ENTRE 60-70 GRADOS C., SIN QUE LA TEMPERATURA DEL BAÑO ALCANCE LOS 90 GRADOS C

DESTILAR DURANTE 30 MINUTOS A PARTIR DE QUE COMIENCE LA DESTILACION. TRANSCURRIDO ESTE TIEMPO, SUPRIMIR EL VACIO Y EL CALOR, DESMONTAR LOS KITASATOS 13. 2.1.7., LAVAR EL REFRIGERANTE CON AGUA DESTILADA SOBRE EL MATRAZ 13.2.1.9, TRANSVASAR LOS LIQUIDOS DE LOS KITASATOS AL MATRAZ ANTERIOR Y LOS LAVADOS DE LOS MISMOS VALORANDO A CONTINUACION CON LA SOLUCION DE ACIDO CLORHIDRICO 13.3.3. REALIZAR UN ENSAYO EN BLANCO OPERANDO DE LA MISMA FORMA

13.5.-CALCULOS

(FORMULA OMITIDA)

SIENDO:

1,4 = FACTOR DE CALCULO

A = VOLUMEN, EN ML, DE ACIDO CLORHIDRICO 0,1N EMPLEADOS EN LA VALORACION DE LA MUESTRA

B = VOLUMEN, EN ML, DE ACIDO CLORHIDRICO 0,1N EMPLEADOS EN EL ENSAYO EN BLANCO

F = FACTOR DE LA SOLUCION DE ACIDO CLORHIDRICO 0,1N

N = NORMALIDAD DE LA SOLUCION DE ACIDO CLORHIDRICO 0,1N

P = PESO, EN G, DE LA MUESTRA

13.6.-REFERENCIAS

1.-UNA NORMA ESPAÑOLA 64045/73 (PROYECTO)

(FIGURAS DE LAS PIEZAS OMITIDAS)

14.-CARBONATO

14.1.-PRINCIPIO

DESCOMPOSICION DE LOS CARBONATOS MEDIANTE LA ACCION DEL ACIDO CLORHIDRICO Y COMPARACION DEL VOLUMEN DE ANHIDRIDO CARBONICO DESPRENDIDO FRENTE A UNA CANTIDAD CONOCIDA DE CARBONATO CALCICO MEDIDO EN LAS MISMAS CONDICIONES

14.2.-MATERIAL Y APARATOS

14.2.1.-APARATO DE SCHEREIBLES -DIETRICH, SEGUN FIGURA 14.1

14.3.-REACTIVOS

14.3.1.-ACIDO CLORHIDRICO , D = 1,10

14.3.2.-CARBONATO DE CALCIO

14.3.3.-SOLUCION DE ACIDO SULFURICO 0,1N O APROXIMADO, COLOREADA CON ROJO EN METILO

14.4.-PROCEDIMIENTO

SEGUN LA CONCENTRACION EN CARBONATOS DE LA MUESTRA PESAR: 0,5 G CUANDO LA RIQUEZA ESTE COMPRENDIDA ENTRE EL 50% Y 100% EXPRESADO EN CARBONATO CALCICO

1 G CUANDO LA RIQUEZA ESTE COMPRENDIDA ENTRE EL 10% Y EL 50% EXPRESADO EN CARBONATO CALCICO

1 G CUANDO LA RIQUEZA ESTE COMPRENDIDA ENTRE EL 10% Y EL 50% EXPRESADO EN CARBONATO CALCICO

2 G A 3G CUANDO LA RIQUEZA SEA INFERIOR AL 10% EXPRESADO EN CARBONATO CALCICO

UNA VEZ PESADA LA CANTIDAD IDONEA DE MUESTRA A ANALIZAR INTRODUCIDA EN EL FRASCO (4) DEL APARATO DE SHREIBLES-DIETRICH, EL CUAL ESTARA PROVISTO DE UN PEQUEÑO TUBO DE MATERIAL IRROMPIBLE CONTENIENDO 10 ML DE LA SOLUCION 14.3.1. CONECTAR A CONTINUACION EL FRASCO CON EL APARATO. GIRAR LA LLAVE (5) TRES VECES DE FORMA QUE EL TUBO (1) COMUNIQUE CON EL EXTERIOR

POR MEDIO DEL TUBO MOVIL (2), QUE ESTA LLENO DE ACIDO SULFURICO COLOREADO (14.3.3.) Y UNIDO AL TUBO GRADUADO (1), LLEVAR EL NIVEL DEL LIQUIDO A LA GRADUACION DE CERO. GIRAR LA LLAVE (5) DE MODO QUE HAGA COMUNICAR LOS TUBOS (1) Y (2) Y COMPROBAR EL NIVEL A CERO

PREVIA INCLINACION DEL FRASCO (4), DEJAR PASAR LENTAMENTE TODO EL ACIDO CLORHIDRICO (14.3.3.) SOBRE LA MUESTRA. IGUALAR LA PRESION BAJANDO EL TUBO (2). AGITAR EL FRASCO (4) HASTA QUE CESE POR COMPLETO EL DESPRENDIMIENTO DEL GAS CARBONICO

RESTABLECER LA PRESION REDUCIENDO EL LIQUIDO AL MISMO NIVEL EN LOS TUBOS (1) Y ( 2). HACER LA LECTURA PASADOS UNOS MINUTOS, HASTA QUE EL VOLUMEN GASEOSO PERMANEZCA CONSTANTE

EFECTUAR EN LAS MISMAS CONDICIONES UN ENSAYO COMPARATIVO CON 0,5 GRADOS DE CARBONATO DE CALCIO (14.3.2.)

14.5.-CALCULO

(FORMULA OMITIDA)

14.6.-OBSERVACIONES

14.6.1-CUANDO LA MUESTRA TOMADA ES SUPERIOR A 2 GRAMOS INTRODUCIR PREVIAMENTE 15 ML DE AGUA DESTILADA EN EL FRASCO (4) Y MEZCLAR ANTES DE COMENZAR EL ANALISIS. EMPLEAR EL MISMO VOLUMEN DE AGUA PARA EL ANALISIS COMPARATIVO

14.2.2.-SI SE UTILIZA UN APARATO DE UN VOLUMEN DIFERENTE AL DE SCHEIBLER DIETRICH, ES NECESARIO ADAPTAR LA CANTIDAD DE MUESTRA TOMADA DE LA EBULLICION Y LA SUSTANCIA A COMPARAR, ASI COMO, EL CALCULO DE RESULTADOS

14.7.-REFERENCIA

1.- JOUMAL OFFICIEL DES COMMUNANTES EUROPEENNES. NUM. 155/18 DE FECHA DE 12-7-1971

(FORMULA OMITIDA)

15.-AFLATOXINA B1

15.1.-PRINCIPIO

EXTRACCION DE LA MICOTOXINA CON LA MEZCLA ACETONITRILO SOLUCION ACUOSA CLK 4 % (9 + 1), FILTRACION Y PURIFICACION DE UNA PARTE ALICUOTA CON DISTINTOS SOLVENTES Y CAMBIOS DE PH. EVAPORACION DEL EXTRACTO LIMPIO Y REDISOLUCION EN CLOROFORMO. SEPARACION DE LA TOXINA POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA Y CONFIRMACION DE LA MISMA MEDIANTE REACCION CON ACIDO SULFURICO Y ACIDO TRIFLUOROACETICO Y POSTERIOR CUANTIFICACION DE LA MICOTOXINA POR DENSITOMETRIA O POR EL METODO DEL LIMITE DE DETECCION

ESTE METODO PERMITE DETECTAR UN MINIMO DE 5 MIGROG/KG DE AFLATOXINA B1

15.2.-MATERIAL Y APARATOS

15.2.1.-BALANZA Y MICROBALANZA CON PRECISION DE 1 Y 0,0001 MG RESPECTIVAMENTE

15.2.2.-MOLINO

15. 2.3.-MATRACES ERLENMEYER COLOR AMBAR, DE 500 ML, CUELLO ESMERILADO 29/32 Y TAPON DE VIDRIO COLOR AMBAR

15.2.4.-AGITADOR DE VAIVEN O DE MUÑECA

15.2.5.-PAPEL DE FILTRO SIN CENIZAS DE 9 CM DE DIAMETRO, FILTRACION RAPIDA

15.2.6.-EMBUDOS DE FILTRACION DE APROXIMADAMENTE 50 MM DE DIAMETRO INTERIOR Y CUELLO CORTO

15.2.7.-PIPETA DE 50 ML

15.2.8.-PERA DE GOMA PARA SUCCION ADAPTABLE A LA PIPETA ANTERIOR 15.2.7

15.2.9.-EMBUDO DE DECANTACION FORMA DE PERA COLOR AMBAR, DE 150 ML, CUELLO ESMERILADO 14/23, CON TAPON DE PLASTICO INATACABLE POR LIQUIDOS ORGANICOS Y LLAVE DE TEFLON

15.2.10.-JERINGA HIPODERMICA DE 50 ML CON AGUJA FORMADA POR UN TUBO DE TEFLON DE 8-9 CM. DE LARGO Y 2 MM. DIAMETRO INTERIOR O BIEN TUBO DE VIDRIO ESTRECHO DE 13-14 CM DE LARGO Y 5-6 MM DE DIAMETRO INTERIOR, ESTE TUBO TENDRA UN ESTRECHAMIENTO EN UNO DE SUS EXTREMOS DE 2-3 CM DE LARGO Y 2 MM DIAMETRO INTERIOR E IRA CONECTADO A UNA TROMPA DE AGUA PARA VACIO POR MEDIO DE TUBO DE TEFLON

15.2.11.-TUBO DE VIDRIO FORMA PERA COLOR AMBAR, RESISTE AL VACIO (FIG.1)

15.2.12.-ROTAVAPOR

15.2.13.-BAÑO DE AGUA REGULABLE ENTRE 20-100 GRADOS C MAS MENOS 1 GRADO C

15.2.14.-BOMBA DE VACIO DE MEMBRANA, CON VALVULAS Y MEMBRANA DE TEFLON. LA BOMBA LLEVARA UN MEDIDOR INCORPORADO QUE PERMITIRA REGULAR UNA DEPRESION ENTRE 0-0,95 KG/CM.2

15.2.15.-CAMPANA EXTRACTORA DE GASES

15.2.16.-DIVISOR DE CROMATOPLACES CON 20 PUAS

15.2.17.-BASTIDOR DE CROMATOPLACAS

15.2.18.-ESTUFA DE DESECACION REGULABLE ENTRE 20-200 GRADOS C. MAS MENOS 1 GRADO C

15.2.19.-DESECADORES DE VIDRIO Y ARMARIOS DESECADORES CON SILICA GEL COMO AGENTE DESECANTE

15.2.20.-MINIVIALES DE 1 Y 5 ML RECUBIERTOS CON LA HOJA DE ALUMINIO, TAPON ROSCA Y OBTURACION DE TEFLON

15.2.21.-TUBOS DE VIDRIO COLOR AMBAR DE 7 ML CAPACIDAD UTIL, TAPON ROSCA Y OBTURACION DE TEFLON

15.2.22.-MICROJERINGAS DE 25 O 50 MICROG CON AGUJA FIJA CEMENTADA Y PUNTA CORTADA A 90 GRADOS, LA PUNTA DEL EMBOLO SERA DE TEFLON

15.2.23.-DISPENSADOR REPETITIVO ADAPTABLE A LAS MICROJERINGAS ANTERIORES 15.2.22, EL DISPENSADOR REPETITIVO PERMITE DESCARGAR 1/50 DE LA CAPACIDAD TOTAL DE LA MICROJERINCA AL APRETAR EL BOTON

15.2.24.-SECADOR DE AIRE

15.2.25.-CAMARA DE SEPARACION CROMATOGRAFICA DE 210 X 88 X 210 MM APROXIMADAMENTE, LA CAMARA TENDRA RANURAS PARA LA INSERCION DE CROMATOPLACAS DE 20 X 20 CM Y TAPA BOTON ESMERILADA

15.2.26.-PULVERIZADOR DE REACTIVOS CON CAMARA DE GAS IMPULSOR INTERCAMBIABLE

15.2.27.-CAMARA DE PULVERIZACION

15.2.28.-LAMPARA ULTRAVIOLETA CON LUZ UV DE LONGITUD DE ONDA LARGA 366 NM Y LUZ UV DE LONGITUD DE ONDA CORTA 254 NM. LA LAMPARA DEBE TENER UN FILTRO AZUL-VIOLETA TIPO UG-5 DE SCHOTT GERMANY O EQUIVALENTE A TRAVES DEL CUAL PASA LA LUZ UV DE 366 Y 254 NM, ESTE FILTRO AZUL-VIOLETA TIENE UN PASO DE BANDA DE 200-400 NM Y UN MAXIMO DE 330 NM. LA LAMPARA DEBE TENER UNA INTENSIDAD DE LUZ A 366 NM DE FORMA QUE PUEDE VERSE CLARAMENTE UNA MANCHA DE AFLATOXINA B1 DE 0,0004 MICROG POR PROPIA FLUORESCENCIA AZUL A LA LUZ UV DE 366 NM O BIEN DE 0,0002 MICROG POR FLUORESCENCIA AMARILLA A LA LUZ UV DE 366 NM DESPUES DE HABER PULVERIZADO CON SOLUCION ACUOSA DE ACIDO SULFURICO AL 25%, TODO ELLO SOBRE UNA CROMATOPLACA DESPUES DEL DESARROLLO CON EL ELUYENTE ADECUADO Y SITUADA LA PLACA A UNA DISTANCIA DE 10 CM DE LA LAMPARA

15.2.29.-FILTRO AMARILLO CLARO PARA LA PROTECCION DE LOS OJOS EN LA OBSERVACION DE LAS CROMATOPLACAS A LA LUZ UV, TIPO CG-4 DE SCHOTT GERMANY O EQUIVALENTE QUE DEJE PASAR SOLO LA LUZ DE 450 NM

15.2.30.-ESPECTROFOTOMETRO DE DOBLE HAZ CON RANGO DE 180-800 NM

15.2.31.-AGITADOR PARA TUBOS

15.2.32.-MICROPIPETAS DE 2 Y 250 MICROL

15.2.33.-FLUORDENSITOMETRO

15.3.-REACTIVOS

15.3.1.- ACETONITRILO

15.3.2.-SOLUCION ACUOSA DE CLORURO POTASICO AL 4% (P /V)

15.3.3.-ISOOCTANO

15.3.4.-ACIDO CLORHIDRICO 1N

15.3.5.-CLOROFORMO

15.3.6.-CLOROFORMO-ACETONA (176 + 24)

15.3.7.-CLOROFORMO-ETER ETILICO -ACIDO ACETICO (170 + 30 + 10)

15.3.8.-TOLUENO-CLOROFORMO-ACETONA (30 + 150 + 20)

15.3.9.-TOLUENO-CLOROFORMO-ACETONA-AC. FORMICO 90% (30 + 150 + 20 + 0,5)

15.3.10.-CLOROFORMO-ACETONA-PROPANOL-2 (165 + 30 + 5)

15.3.11.-BENCENO-CLOROFORMO-ACETONA (90 + 80 + 30)

15.3 .12.-TOLUENO-ACETATO DE ETILO-AC.FORMICO 90% (100 + 90 + 10)

15.3 .13.-TOLUENO-ACETATO DE ETILO-CLOROFORMO-AC.FORMICO 90% (70 + 50 + 50 + 20)

15.3.14.-BENCENO-METANOL-ACIDO ACETICO (180 + 10 + 10). (MEZCLAR METANOL-ACIDO ACETICO (10 + 10) CON BENCENO EN LA RELACION (180 + 10 + 10)

15.3.15.-CLOROFORMO-ACETONA (180 + 20)

15.3.16.-CLOROFORMO -ACETONA (186 + 14)

15.3.17.-SOLUCION DE AC.SULFURICO 98%-AGUA DESTILADA (1 + 3). ENFRIAR ANTES DE SU USO

15.3.18.-SOLUCION DE ACIDO TRIFLUOROACETICO 99% BENCENO O CLOROFORMO (1 + 1)

15.3.19.-ETER ETILICO ANHIDRO

15 .3.20.-PATRON DE AFLATOXINA B1, QUE DEBE ESTAR GUARDADO EN FRASCO DE VIDRIO COLOR AMBAR BIEN CERRADO Y A 4 GRADOS C. CUANDO VAYA A EMPLEARSE DEBE ESTAR A TEMPERATURA AMBIENTE

15.3.21.-SOLUCION DE RESERVA PATRON DE AFLATOXINA B1 EN CLOROFORMO. PREPARAR UNA SOLUCION QUE CONTENGA 10 MG DE AFLATOXINA B1/ML DE CLOROFORMO. MEDIR EL ESPECTRO DE ABSORCION ENTRE 300-370 NM Y MEDIR LA EXTINCION (A) A 364 NM.CALCULAR LA CONCENTRACION DE AFLATOXINA B1 EN MG/ML SEGUN LA FORMULA SIGUIENTE :

(FORMULA OMITIDA)

SI SE COLOCAN EN UNA CROMATOPLACA 5 MICROL. DE LA SOLUCION ANTERIOR DE PATRON DE AFLATOXINA B1, SE DESARROLLA LA CROMATOPLACA CON UNO DE LOS SOLVENTES ANTERIORES 15.3.6-15.3.16 Y SE EXAMINA UNA VEZ SECA, A LA LUZ UV DE 366 NM: DEBE VERSE SOLAMENTE UNA MANCHA Y NO SERA PERCEPTIBLE NINGUNA FLUORESCENCIA EN EL LUGAR DONDE INICIALMENTE SE HA COLOCADO EL VOLUMEN DE 5 MICROL. CORRESPONDIENTE A LA SOLUCION PATRON DE AFLATOXINA B1

15.3.22.-SOLUCION DE TRABAJO PATRON DE AFLATOXINA B1, EN CLOROFORMO. PREPARAR A PARTIR DE LA SOLUCION 15.3.21., UNA SOLUCION DE TRABAJO QUE CONTENGA 5 MICROG.DE AFLATOXINA B1/ML DE CLOROROFORMO , CONSERVAR COMO EN 15.3.20., CON UN MINIMO DE SUPERFICIE DE EVAPORACION

15.3.23.-SOLUCION PATRON DE AFLATOXINA B1 EN CLOROFORMO, PARA ENSAYO DEL LIMITE DE DETECCION. PREPARAR A PARTIR DE LA SOLUCION 15.3.20 ,. UNA SOLUCION QUE CONTENGA 0,1 MICROG DE AFLATOXINA B1/ML DE CLOROFORMO . CONSERVAR COMO EN 15.3.22

15.3.24.-CROMATOPLACAS TIPO MACHEREY- NAGEL SIL G-25HR CON BASE DE VIDRIO YA PREPARADAS DE 20 X 20 CM Y 0,25 MM DE ESPESOR DE CAPA FORMADA POR SILICA GEL CON YESO (SO4 CA) Y UNA PEQUEÑA CANTIDAD DE MATERIAL ORGANICO POLIMERO O CROMATOPLACA EQUIVALENTE

CON UN DIVISOR DE CROMATOPLACAS 15.2.16., DIVIDIR LAS PLACAS EN 20 FRANJAS DE 1 CM. DE ANCHO CADA UNA. ELIMINAR EL SILICA GEL SOBRANTE Y ACTIVARLAS (COLOCADAS EN POSICION VERTICAL)CALENTANDOLAS A 110 GRADOS C. POR ESPACIO DE 30 MINUTOS. GUARDARLAS EN DESECADOR 15.2.19., HASTA EL MOMENTO DE SU USO EN QUE DEBEN ESTAR A TEMPERATURA AMBIENTE

15.3.25.-GAS NITROGENO PURO

15.4.-PROCEDIMIENTO

15.4.1.- PESAR 60 G.DE MUESTRA MOLIDA DE FORMA QUE PASE A TRAVES DE UN TAMIZ DE 0,8 MM DE LUZ DE MALLA Y HOMOGENEIZAR Y LLEVAR EL ERLENMEYER 15.2.3. AÑADIR 180 ML DE ACETONITRILO Y 20 ML DE SOLUCION ACUOSA DE CLORURO POTASICO AL 4%, TAPAR Y AGITAR VIGOROSAMENTE 30 MINUTOS EN AGITADOR 15.2.4. FILTRAR EL EXTRACTO A TRAVES DE PAPEL DE FILTRO 15.2.5. Y RECOGER 50 ML. DE FILTRADO (CUBRIR EL PAPEL DE FILTRO CON VIDRIO DE RELOJ DURANTE LA FILTRACION)

TOMAR CON PIPETA 15.2.7., 50 ML DE FILTRADO ANTERIOR Y LLEVARLOS AL EMBUDO DE DECANTACION 15.2.9. AÑADIR 50 ML DE ISOOCTANO, TAPAR Y AGITAR 15- 20 SEGUNDOS, DEJAR SEPARAR CAPAS Y ELIMINAR LA CAPA SUPERIOR DE ISOOCTANO CON UNA JERINGA O TUBO ESTRECHO 15.2.10 (CUIDADO NO ASPIRAR LA CAPA INFERIOR DE ACETONITRILO, AUNQUE QUEDE UNA PEQUEÑA CANTIDAD DE ISOOCTANO) . REPETIR LA OPERACION ANTERIOR 3 VECES CON 50 ML DE ISOOCTANO CADA VEZ Y ELIMINAR EL ISOOCTANO EN CADA LAVADO COMO ANTERIORMENTE. AÑADIR A LA CAPA DE ACETONITRILO 12.5 ML DE AGUA DESTILADA Y AGITAR

AÑADIR 25 ML DE CLOROFORMO, TAPAR Y AGITAR 15-20 SEGUNDOS. DEJAR SEPARAR CAPAS. FILTRAR LA CAPA INFERIOR DE CLOROFORMO-ACETONITRILO A TRAVES DE PAPEL DE FILTRO 15.2.5., LLENO HASTA EL BORDE DE SULFATO SODICO ANHIDRO. RECOGER EL FILTRADO EN EL TUBO DE FORMA DE PERA 15.2.11. AÑADIR A LA CAPA ACUOSA QUE QUEDA EN EL EMBUDO DE DECANTACION 15. 2.9., 1 ML DE ACIDO CLORHIDRICO 1N Y AGITAR.AÑADIR 20 ML DE CLOROFORMO TAPAR Y AGITAR 15-20 SEGUNDOS, DEJAR SEPARAR CAPAS Y FILTRAR LA CAPA INFERIOR CLOROFORMICA PASANDOLA A TRAVES DEL SULFATO SODICO ANHIDRO ANTERIOR Y REUNIENDO ESTE FILTRADO CON EL QUE YA TENEMOS EN EL TUBO 15.2.11. REPETIR LA EXTRACCION DE LA CAPA ACUOSA 3 VECES CON 10 ML DE CLOROFORMO CADA VEZ Y FILTRAR CADA EXTRACCION COMO ANTERIORMENTE REUNIENDO TODOS LOS FILTRADOS EN EL TUBO 15.2.11

15.4.2.-LLEVAR EL TUBO 15.2.11., A ROTAVAPOR 15.2.12., Y EVAPORAR HASTA UNOS 2 ML CON VACIO (DEPRESION = 0,6-0,7 KG/CM2) Y A 50-55 GRADOS C. ENFRIAR, LAVAR LAS PAREDES DEL TUBO CON 3 PORCIONES DE 1 ML.DE CLOROFORMO LLEVANDO EL LIQUIDO A LA PARTE ESTRECHA GRADUADA Y CONTINUAR LA EVAPORACION EN EL ROTAVAPOR HASTA 0,1-0,2 ML.CON VACIO (DEPRESION = 0,7-0,8 KG/CM2 Y A 50-55 GRADOS C.). CADA VEZ QUE SE INTERRUMPA EL VACIO HAY QUE INTRODUCIR NITROGENO

ENFRIAR Y AÑADIR CLOROFORMO HASTA LA DIVISION 1 ML DE LA PARTE ESTRECHA GRADUADA DEL TUBO 15.2.11. TAPAR Y LLEVAR EL AGITADOR DE TUBOS 15.2.31., REDISOLVIENDO Y HOMOGENEIZANDO LA SOLUCION

EL VOLUMEN FINAL DEL EXTRACTO PARA LA CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA SERA DE 1 ML Y LLAMAREMOS A ESTE EXTRACTO: SOLUCION A

LLEVAR EL ESTRACTO SOLUCION A, A MINIVIALES 15.2.20 O TUBOS 15.2.21

ANALISIS CUALITATIVO

15.5.-DESARROLLOS

15.5.1.-EN UNA LINEA IMAGINARIA SITUADA A 4 CM DE LA BASE DE LA CROMATOPLACA 15.3.24., COLOCAR CON 15.2.22 Y 15.2.23. (SIN DETERIORAR LA SUPERFICIE DEL SILICA GEL) LOS SIGUIENTES VOLUMENES A INTERVALOS DE 1 CM; CADA UNO EN UNA FRANJA Y A APROXIMADAMENTE 0,5 CM DE LOS LADOS DE LA MISMA: DOS DE 3 MICROL. Y DOS DE 5 MICROL. DE MUESTRA EXTRACTO SOLUCION A (NO EMPLEAR LA FRANJA DE LOS EXTREMOS DE LA CROMATOPLACA )

EN UNO DE LOS VOLUMENES CORRESPONDIENTES A 3 MICROL. Y A 5 MICROL. SUPERPONER ADECUADAMENTE CON 15.2.22., Y 15.2.23., 3 MICROL. DE LA SOLUCION DE TRABAJO PATRON DE AFLATOXINA B1 15.3.22. (PATRON INTERNO ). EN OTRO PUNTO APARTE COLOCAR 3 MICROL. DE LA SOLUCION AFLATOXINA B1 15 .3.22. (PATRON EXTERNO). HAY QUE CUIDAR DE QUE EL DIAMETRO DE LAS MANCHAS UNA VEZ EFECTUADA LA DEPOSICION TOTAL, NO SERA SUPERIOR A 2-2,5 MM DE DIAMETRO POR LO QUE CON LA MICROJERINGA 15.2.22., ADAPTADA AL DISPENSOR REPETITIVO 15.2.23 SE COLOCARAN LOS VOLUMENES TOTALES EN FRACCIONES O PORCIONES DE VOLUMEN Y SECANDO CADA FRACCION O PORCION CON AIRE CALIENTE (NO MAS DE 35-40 GRADOS C.) 15.2.24., ANTES DE COLOCAR LA SIGUIENTE. NO TRABAJAR CON LUZ NATURAL NI CON LUZ ARTIFICIAL DIRECTA

15.5.2.-TRAZAR EN LA CROMATOPLACA (CON LAPIZ DE GRAFITO) UNA LINEA TRANSVERSAL QUE INDICARA LA ALTURA HASTA DONDE DEBE LLEGAR EL FRENTE DE SOLVENTE DE DESARROLLO; DICHA ALTURA ESTARA CONTADA A PARTIR DE LA LINEA IMAGINARIA DONDE SE HAN COLOCADO LOS VOLUMENES DE MUESTRA EXTRACTO SOLUCION A Y LOS PATRONES. LA ALTURA SERA EN GENERAL DE 11 CM

15.5.3.-EN LAS CAMARAS DE SEPARACION CROMATOGRAFICA 15.2.25 COLOCAR 200 ML APROXIMADOS DE SOLVENTE DE DESARROLLO 15.3. 6., QUE ALCANZARAN EN LA CAMARA UNOS 1,4 CM DE ALTURA, TAPAR Y DEJAR EN REPOSO 5-10 MINUTOS. INTRODUCIR DESPUES LA CROMATOPLACA (ESTA ESTARA A TEMPERATURA AMBIENTE) EN EL INTERIOR DE LA CAMARA 15.2.25., EN PERFECTA POSICION VERTICAL Y DE FORMA QUE LA CARA CON SILICA GEL ESTE ENFRENTE A UNOS 3-4 CM DE LA PARED DE LA CAMARA DE DESARROLLO 15.2.25. TAPAR Y DESARROLLAR EN CAMARA INSATURADA HASTA QUE EL FRENTE DE SOLVENTE ALCANCE LA ALTURA INDICADA EN 15.5.2. LA TEMPERATURA DE TRABAJO EN EL DESARROLLO SERA DE 23-24 GRADOS C. NO TRABAJAR CON LUZ NATURAL NI CON LUZ ARTIFICIAL DIRECTA

15.5.4.-SECAR LA CROMATOPLACA Y LLEVAR A VITRINA DE GASES OSCURA 15.2.15. DEJAR SECAR EL AIRE. FORZAR EL SECADO FINAL CON UNA SUAVE CORRIENTE DE AIRE MODERADAMENTE CALIENTE (NO MAS DE 35-40 GRADOS C.) 15.2.24. O CON CORRIENTE DE NITROGENO

15.6.-DETECCION

15.6.1.-COLOCAR LA CROMATOPLACA SOBRE FONDO NEGRO , EN HABITACION OSCURA Y A 10 CM DE DISTANCIA DE LA LAMPARA UV 15.2 .28

EXAMINAR (CON EL FILTRO AMARILLO 15.2.29.) LA CROMATOPLACA A LA LUZ UV DE 366 NM. A 366 NM LA AFLATOXINA B1 APARECE CON LA MANCHA AZUL BRILLANTE FLUORESCENTE Y LIMITE DE DETECCION DE 0,0004 MICROG./MANCHA

PULVERIZAR LA CROMATOPLACA CON SOLUCION DE ACIDO SULFURICO-AGUA (1 + 3) 15.3.17., Y EXAMINARLA DE NUEVO A LA LUZ UV DE 366 NM. A 366 NM Y EN ESTAS CONDICIONES LA AFLATOXINA B1 APARECE CON UNA MANCHA AMARILLO BRILLANTE FLUORESCENTE Y LIMITE DE DETECCION DE 0,0002 MICROG./MANCHA

COMPARAR LA MANCHA DE EXTRACTO SOLUCION A PROBLEMA CON EL STANDAR INTERNO DE AFLATOXINA B1 CORRESPONDIENTE Y POR EL MISMO RF, FLUORESCENCIA AZUL PROPIA Y FLUORESCENCIA AMARILLA OBTENIDA CON LA SOLUCION DE ACIDO SULFURICO 15.3.17 A 366 NM RESPECTIVAMENTE, PROCEDER A LA INICIAL IDENTIFICACION

SI LA CROMATOPLACA SE OBSERVA A LA LUZ UV DE 254 NM, LA FLUORESCENCIA AZUL Y AMARILLO BRILLANTE SE CONVIERTE EN AZUL Y AMARILLO MUY APAGADO Y SIN FLUORESCENCIA CON UN LIMITE DE DETECCION MUCHO MAYOR Y NO INTERESANTE PARA EL ANALISIS

15.7.-CONFORMACION

15 .7.1.-CONFIRMAR LA PRESENCIA DE AFLATOXINA B1 EN LA MUESTRA PROBLEMA , POR LA APLICACION DE LA TRANSFORMACION DE LA AFLATOXINA B1 EN AFLATOXINA B2A POR MEDIO DEL ACIDO TRIFLUOROACETICO

TOMAR DOS CROMATOPLACAS 15 .3.24. Y PROCEDER EN CADA UNA DE ELLAS SEGUN SE INDICA A CONTINUACION :

SELECCIONAR DOS ZONAS DE LA CROMATOPLACA (ZONA A Y ZONA B)

EN LA ZONA A COLOCAR LOS VOLUMENES DE MUESTRA EXTRACTO SOLUCION IGUAL COMO SE MENCIONA EN LA TECNICA (PROBLEMA, PROBLEMA + PATRON INTERNO DE AFLATOXINA B1 PATRON EXTERNO DE AFLATOXINA B1). EN LA ZONA B PROCEDER DE IGUAL MANERA CON LAS MISMAS MUESTRAS QUE LAS DE LA ZONA A. TAPAR PROTEGIENDO LA ZONA A CON PLACA DE VIDRIO Y EN CADA UNA DE LAS MANCHAS DE LA ZONA B SUPERPONER CON MICROPIPETA 15.2.32., 2 MICROL. DE SOLUCION DE ACIDO TRIFLUOROACETICO 15.3.18., RECIEN PREPARADA. DEJAR REACCIONAR 5 MINUTOS (PROTEGER LA CROMATOPLACA DE LA LUZ). SECAR LA CROMATOPLACA (PROTEGERLA DE LA LUZ) CON CORRIENTE DE AIRE CALIENTE (NO MAS DE 35 GRADOS-40 GRADOS C) DURANTE 10 MINUTOS O BIEN CON CORRIENTE DE NITROGENO DURANTE 20 MINUTOS. PROCEDER AL DESARROLLO DE LAS DOS CROMATOPLACAS TAL COMO SE INDICA EN 15.5.3. , Y CON LOS SOLVENTES DE DESARROLLO 15.3.6., Y 15.3.7., RESPECTIVAMENTE

PROCEDER DESPUES COMO EN 15.5.4

EXAMINAR (CON EL FILTRO AMARILLO 15.2.29.) LA CROMATOPLACA A LA LUZ UV DE 366 NM PREVIO HABER COLOCADO LA CROMATOPLACA SOBRE FONDO NEGRO, EN HABITACION OSCURA Y A 10 CM DE DISTANCIA DE LA LAMPARA UV 15.2.28

COMPARAR LA ZONA A CON LA ZONA B Y LOS PROBLEMAS Y STANDARDS INTERNO Y EXTERNO CORRESPONDIENTES. EN LA ZONA A LA AFLATOXINA B1 ESTARA EN LA FORMA Y EL RF HABITUAL (MANCHA CON FLUORESCENCIA AZUL BRILLANTE). EN LA ZONA B LA AFLATOXINA B1 QUE AHORA ESTARA TRANSFORMADA EN B2A APARECERA CON MANCHA DE FLUORESCENCIA AZUL BRILLANTE PERO MUY CERCA DE LA LINEA IMAGINARIA DONDE SE HAN COLOCADO INICIALMENTE LOS VOLUMENES, EL RF QUE TENDRA AHORA LA AFLTAXINA B2A SERA DE APROXIMADAMENTE 1/4 DEL RFA COMO APARECE LA AFLATOXINA B1 EN LA ZONA A

PROCEDER DESPUES AL PULVERIZADO DE LAS CROMATOPLACAS CON LA SOLUCION ACUOSA DEL ACIDO SULFURICO 15.3.17., Y VOLVER A COMPARAR OBSERVANDO DE NUEVO A LA LUZ UV DE 366 NM. LA AFLATOXIMA B1 EN LA ZONA A Y SU DERIVADO AFLATOXINA B2 EN LA ZONA B APARECERAN CON UN MANCHA DE FLUORESCENCIA AMARILLO BRILLANTE

SI LA MANCHA SOSPECHOSA EN LA MUESTRA PROBLEMA QUE HA CUMPLIDO LAS CONDICIONES MENCIONADAS EN 15.6 CUMPLE TAMBIEN LAS CONDICIONES DE 15.7 ES QUE ES AFLATOXINA B1

ANALISIS CUANTITATIVO

15.8.-METODO DEL LIMITE DE DETECCION

15. 8.1.-TOMAR CON MICROPIPETA 15.2.32., 250 MICROL. DEL EXTRACTO SOLUCION A Y AÑADIR 250 MICROL. DE CLOROFORMO. LLAMAREMOS A ESTA NUEVA SOLUCION: EXTRACTO SOLUCION B

15.8.2.-PREPARAR FRESCA LA SOLUCION STANDARD DE AFLATOXINA B1 15.3.23

15.8.3.-EN UNA LINEA IMAGINARIA SITUADA A 4 CM. DE LA BASE DE UNA CROMATOPLACA 15.3.24., DEPOSITAR TENIENDO EN CUENTA LO QUE INDICA EN 15.5.1. DE 1 A 10 MICROL. DE EXTRACTO SOLUCION B. A CONTINUACION DEPOSITAR DE LA MISMA FORMA DE 1 A 8 MICROL. DE SOLUCION PATRON DE AFLATOXINA B1 15.2.23., RECIEN PREPARADA

15.8.4.-PROCEDER AL DESARROLLO TAL COMO SE INDICA EN 15.5.3., Y CON EL SOLVENTE DE DESARROLLO QUE SE HAYA EMPLEADO PARA EL ANALISIS CUALITATIVO. ATENDER 15.5.4.

15.8.5. PULVERIZAR LA CROMATOPLACA CON LA SOLUCION ACUOSA DE ACIDO SULFURICO 15.3.17 Y PROCEDIMIENTO COMO EN 15.6.1., EXAMINAR (CON EL FILTRO AMARILLO 15.2.29.) LA CROMATOPLACA A LA LUZ UV DE 366 NM. SITUARSE EN LA ZONA B1 QUE APARECERA CON FLUORESCENCIA AMARILLA Y BUSCAR CUAL ES LA ULTIMA MANCHA DE LA AFLATOXINA B1 QUE SE VE TANTO EN LA MUESTRA PROBLEMA CONTAMINADA COMO EN EL PATRON DE AFLATOXINA B1 DEPOSITADO (PARA EL PATRON LA ULTIMA MANCHA DE MICOTOXINA QUE SE VE DEBE CORRESPONDER A 0,0002 MICROG. APROXIMADAMENTE). EFECTUAR INTERPOLACION ENTRE DOS VOLUMENES SI ES NECESARIO. LA ULTIMA MANCHA DE LA AFLOTOXINA B1 QUE SE VE EN LA MUESTRA CONTAMINADA CORRESPONDERA A LOS MISMOS MICROG. DE AFLATOXINA B1 DE LA ULTIMA MANCHA QUE SE VE EN EL STANDARD DEPOSITADO

CALCULO

(FORMULA 1 OMITIDA)

15.8.6.-SI EN LA MUESTRA CONTAMINADA LA AFLATOXINA B1 SE VE EN TODAS LAS MANCHAS PROCEDER A TOMAR CON MICROPIPETA 15.2.32., 250 MICROL. DEL EXTRACTO SOLUCION B Y AÑADIR 2250 MICROL. DE CLOROFORMO. LLAMAREMOS A ESTA NUEVA SOLUCION EXTRACTO SOLUCION C.

15.8.7.-PROCEDER COMO EN 15.8.3., PERO CON EL EXTRACTO SOLUCION C.

CALCULO

MICROG. DE AFLATOXINA B1/KG DE MUESTRA = APLICAR LA FORMULA 1 Y MULTIPLICAR EL RESULTADO POR 10

15.8.8.-SI EN LA MUESTRA CONTAMINADA LA AFLATOXINA B1 SE VE EN TODAS LAS MANCHAS PROCEDER A TOMAR CON MICROPIPETA 15 .2.32., 250 MICROL. DEL EXTRACTO SOLUCION C Y AÑADIR 2250 MICROL. DE CLOROFORMO LLAMAREMOS A ESTA NUEVA SOLUCION EXTRACTO SOLUCION D

15.8.9.-PROCEDER COMO EN 15.8.3. A 15.8.5., PERO CON EL EXTRACTO SOLUCION D

CALCULO

MICROG. DE AFLATOXINA B1/KG DE MUESTRA = APLICAR LA FORMULA 1 Y MULTIPLICAR EL RESULTADO POR 100

15.8.10.-Y ASI SUCESIVAMENTE CON LA MISMA SECUENCIA DE FACTOR DE CALCULO QUE SE DEDUCE DE LOS PASOS ANTERIORES

15.8.11 .-SI HAY DUDA EN LA ULTIMA MANCHA DE AFLATOXINA B1 QUE SE VE CORRESPONDIENTE EL VOLUMEN DE 1 O 2 MICROL.; EFECTUAR LA DILUCION CORRESPONDIENTE Y REPETIR UN NUEVO DESARROLLO PARA FIJAR BIEN LA ULTIMA MANCHA DE AFLATOXINA B1 QUE SE VE ASEGURANDOSE DE QUE LA ANTERIOR YA NO SE VE

ANALISIS CUANTITATIVO

15.9.-METODO FLUORODENSITOMETRICO

15.9.1.-TENIENDO PRESENTE QUE LA AFLATOXINA B1 TIENE UNAS CARACTERISTICAS ESPECTROFOTOMETRICAS PROPIAS SOBRE PLACA DE LONGITUD DE ONDA DE EMISION DE 430 NM Y LONGITUD DE ONDA DE EXCITACION DE 365 NM Y TENIENDO EN CUENTA QUE LA AFLATOXINA B1 TIENE UNAS CARACTERISTICAS ESPECTROFOTOMETRICAS DEL COMPLEJO PROCEDENTE DE LA REACCION QUIMICA SOBRE PLACA DE LONGITUD DE ONDA DE EMISION DE 425 NM Y LONGITUD DE ONDA DE EXCITACION DE 365 NM; LA INTENSIDAD DE FLUORESCENCIA DE LAS MANCHAS DE AFLATOXINA B1 SE MEDIRA CON UN FLUORODENSITOMETRO Y COMPARANDO LA INTENSIDAD DE FLUORESCENCIA DE LAS MANCHAS DEL EXTRACTO CON LAS DEL PATRON SE BUSCARA LA CANTIDAD DE AFLATOXINA B1 QUE SE ENCUENTRA EN LAS MANCHAS CORRESPONDIENTES AL EXTRACTO. DESPUES CON EL CORRESPONDIENTE FACTOR DE DILUCION SE CALCULARA LA CANTIDAD DE AFLATOXINA B1 PRESENTE EN LA MUESTRA, EXPRESANDO EL RESULTADO EN MICROG. DE AFLATOXINA B1/KG DE MUESTRA PROBLEMA

15.10.-OBSERVACIONES

15.10.1.-EL ANALISIS CUANTITATIVO POR EL METODO DEL LIMITE DE DETECCION TAMBIEN PUEDE LLEVARSE A CABO TOMANDO EL LIMITE DE DETECCION DE LA AFLATOXINA B1 POR OBSERVACION DE LA FLUORESCENCIA AZUL DE LA LUZ U.V. DE 366 N, TANTO PARA MUESTRA CONTAMINADA COMO PARA PATRON, SIN EMBARGO ESTE LIMITE ES MAS ALTO QUE SE SITUA EN 0,0004 MICROG./MANCHA Y POR TANTO DISMINUYE LA SENSIBILIDAD

15.10.2.-SI EN EL PATRON DE AFLATOXINA B1 15.3.23., DEPOSITADO EN EL ANALISIS CUANTITATIVO POR EL METODO DEL LIMITE DE DETECCION, SE VEN TODAS LAS MANCHAS, PROCEDER A DILUIRLO EN UNA CONCENTRACION DE 0,07 MICROG./ML POR EJEMPLO Y REPETIR DE NUEVO CON ESTA SOLUCION

15.10.3.-NO DEMORAR TIEMPO EN LOS DISTINTOS PASOS ANALITICOS Y EN ESPECIAL PARA LA CUANTIFICACION POR EL METODO DEL LIMITE DE DETECCION EN DONDE LAS CANTIDADES DE AFLATOXINA B1 SON BAJAS Y PUEDE HABER PERDIDAS IMPORTANTES.

15.10.4.-CON EL METODO DESCRITO, LAS IDENTIFICACIONES Y CONFIRMACIONES DE AFLATOXINA B1 SON BUENAS; SIN EMBARGO , PUEDE DARSE EL CASO DE QUE SEGUN LA NATURALEZA DEL PRODUCTO Y SU ESTADO DE CONSERVACION, TIPO DE CULTIVO Y TRATAMIENTOS PREVIOS COMO PRIMERA MATERIA O BIEN GRAN HETEROGENEIDAD COMO OCURRE EN UN PIENSO COMPUESTO; EL ANALISTA PUEDE ENCONTRARSE ALGUNA VEZ CON PROBLEMAS DE IDENTIFICACION POR APARICION DE INTERFERENCIAS MOLESTAS EN LA ZONA DE LA AFLATOXINA B1; A CONTINUACION SE DESCRIBEN ALGUNAS FORMAS DE SUBSANAR ESTE INCONVENIENTE ESPORADICO:

1) EMPLEAR OTROS SOLVENTES DE DESARROLLO 15.3.8. A 15.3.16.

2) EFECTUAR UN DOBLE DESARROLLO EN LA MISMA DIRECCION Y CON EL MISMO SOLVENTE DE DESARROLLO (PREVIO SECAR LA CROMATOPLACA DESPUES DEL PRIMER DESARROLLO)

3) EFECTUAR UN DOBLE DESARROLLO EN LA MISMA DIRECCION PERO CON DOS SOLVENTES DE DESARROLLO DISTINTOS (PREVIO SECAR LA CROMATOPLACA DESPUES DEL PRIMER DESARROLLO)

4) EFECTUAR UN PRIMER DESARROLLO CON ETER ETILICO ANHIDRO HASTA UNA ALTURA DE 12 CM, SECAR LA CROMATOPLACA Y DESARROLLAR DESPUES EN LA MISMA DIRECCION CON UNO DE LOS SOLVENTES QUE DESPLAZA ADECUADAMENTE LA AFLATOXINA B1 ESTA FORMA 4) SOLO DEBE HACERSE EN CASO MUY NECESARIO PUESTO QUE CUANDO LAS CONTAMINACIONES CON AFLATOXINA B1 SON BAJAS PUEDE HABER DISMINUCION DE SENSIBILIDAD POR FALTA DE COMPACIDAD EN LA MANCHA DE AFLATOXINA B1 DESARROLLADA. SIN EMBARGO ESTA FORMA 4) ES MUY UTIL CUANDO SE ANALIZA MANIOC O MANDIOCA O PRODUCTOS SIMILARES QUE CONTIENEN UNA SUSTANCIA LLAMADA SCOPOLETINA, ESTA SUSTANCIA TIENE UNA FLUORESCENCIA AZUL BRILLANTE MUY INTENSA A LA LUZ UV DE 366 NM Y EN UN DESARROLLO NORMAL LA SCOPOLETINA SE SITUA EN LA ZONA DE LA AFLATOXINA B1 ENMASCARANDO LA PRESENCIA DE ESTA Y PUDIENDO PRESENTARSE A CONFUSION. AUNQUE LA SCOPOLETINA NO APARECE COMO MANCHA CON FLUORESCENCIA AMARILLO BRILLANTE A LA LUZ UV DE 366 NM DESPUES DE PULVERIZAR LA CROMATOPLACA CON LA SOLUCION ACUOSA DE ACIDO SULFURICO 15.3.17., Y POR TANTO SE DESCARTA LA POSIBILIDAD DE CONFUNDIRLA CON AFLATOXINA B1 AL APARECER LA SCOPOLETINA EN LA ZONA DE LA AFLATOXINA B1 IMPOSIBILITA LA IDENTIFICACION DE ESTE CASO DE CONTAMINACION DE LA MUESTRA. POR TANTO EL PRIMER DESARROLLO CON ETER ETILICO ANHIDRO DESPLAZA A LA SCOPOLETINA SIGNIFICATIVAMENTE Y EN CAMBIO DESPLAZA MUY POCO A LA AFLATOXINA B1, UNA VEZ EFECTUADO ESTE PRIMER DESARROLLO Y DESPUES DE SECAR LA CROMATOPLACA, SE EFECTUA EL DESARROLLO DEFINIFIVO CON UNO DE LOS SOLVENTES DE DESARROLLO INDICADOS ANTERIORMENTE 15 .3.6 A 15.3.16.: LA AFLATOXINA B1 ES DESPLAZADA ADECUADAMENTE Y LA SCOPOLETINA TAMBIEN PERO ESTE QUEDA YA FUERA DE LA ZONA CORRESPONDIENTES A LA AFLATOXINA B1 DESPUES DEL DESARROLLO DEFINITIVO

ESTA FORMA 4) ES UTIL TAMBIEN CUANDO HAY PROBLEMAS DE ANALISIS EN PRODUCTOS CONTENIENDO CLOROFILAS, POR EJEMPLO EN PIENSOS COMPUESTOS QUE CONTIENEN MAS DE UN 10% DE HARINA DE ALFALFA, SIN EMBARGO, EL ANALISTA DEBE EFECTUAR PRIMERO UN ANALISIS NORMAL TAL COMO SE INDICA EN LA TECNICA DESCRITA Y JUZGAR DESPUES SI ES NECESARIO EMPLEAR ESTA FORMA 4)

5) EFECTUAR UNA MAYOR DILUCION DE LA MUESTRA EXTRACTO SOLUCION A, LLEVANDO EL VOLUMEN A 2-3 ML SIN EMBARGO, ELLO SE TRADUCE EN UNA MENOR SENSIBILIDAD EN CUANTO A LA MINIMA CONCENTRACION DETECTABLE DE AFLATOXINA B1 AUMENTANDO LOS VALORES DE 4-6 MICROG./KG INDICADOS COMO MINIMO DETECTABLE DE ESTA MICOTOXINA

15.11.-REFERENCIAS

1. ALBERTO GIMENO (1979). J.ASSOC. OFF.ANAL. CHEM. Z62, 579-585

2.-ROBERTS, B.A., PATTERSON, D.S.P. (1975). J.ASSOC. OFF.ANAL.CHEM. 58. 1178-1181

3.-ALBERTO GIMENO (1980). J.ASSOC. OFF. ANAL. CHEM. 63. 182-186

4.-STOLOFF, L., NESHEIM, S., YIN, L., RODRICKS, J.V., STACK, M., CAMPBELL, A. D. (1971). J .ASSOC.OFF.ANAL.CHEM.54, 91-97

(FIGURA OMITIDA)

ANEXO VIII.-PRODUCTOS ORGANICOS FERTILIZANTES

1.-PREPARACION DE LA MUESTRA

1.1.-PRINCIPIO

ESTE METODO ESTABLECE LAS CONDICIONES GENERALES DE PREPARACION DE LA MUESTRA; LAS DE CARACTER PARTICULAR ESTAN INDICADAS EN LOS METODOS CORRESPONDIENTES

1.2.-PROCEDIMIENTO

ABRIR EL RECIPIENTE Y VERTER EL CONTENIDO SOBRE UN PAPEL SATINADO

TOMAR MEDIANTE CUARTEO, UNOS 20 G DE MUESTRA PESANDOLA SOBRE UN PESASUSTANCIAS DE UNOS 50 ML Y DETERMINANDO EN EL MISMO SU HUMEDAD SEGUN EL METODO OFICIAL N. 2

A CONTINUACION, PREVIA DESECACION SI ES NECESARIO, TRITURAR EL RESTO MANUALMENTE POR MEDIO DE UN MOLINILLO ELECTRICO, EVITANDO CALENTAMIENTO EXCESIVO Y USANDO LA CANTIDAD NECESARIA PARA QUE SE REALICE UNA OPTIMA MOLIENDA

DE ESTA MUESTRA FINA TOMAR LAS DISTINTAS PORCIONES PARA EL ANALISIS

2.-HUMEDAD (PERDIDA DE PESO A 105 GRADOS C.)

2.1.-PRINCIPIO

EL AGUA QUE CONTIENE LA MUESTRA SE DETERMINA POR DESECACION EN ESTUFA

EL METODO NO ES APLICABLE A MUESTRAS QUE PRODUCEN SUSTANCIAS VOLATILES DIFERENTES DEL AGUA A LA TEMPERATURA DE DESECACION

2.2.-MATERIAL Y APARATOS

2.2.1.-PESASUSTANCIAS CAPAZ PARA 50 CM3

2.2.2.-ESTUFA CON REGULACION DE TEMPERATURA A 105 GRADOS C

2.2.3.-DESECADOR

2.3 .-PROCEDIMIENTO

INMEDIATAMENTE DESPUES DE ABRIR EL PRECINTO, PESAR CON PRECISION DE MG ALREDEDOR DE 20 G DE MUESTRA EN UN PESASUSTANCIAS PREVIAMENTE TARADO

COLOCAR EN ESTUFA A 105 GRADOS C. MAS MENOS 1 GRADO C. HASTA PESO CONSTANTE, PROCURANDO NO INTRODUCIR NUEVAS MUESTRAS EN LA ESTUFA DURANTE LA ULTIMA FASE DE SECADO

DETERMINAR LA PERDIDA DE PESO PARA EXPRESAR EL RESULTADO EN %

2.4.-EXPRESION DE LOS RESULTADOS

EXPRESAR LOS RESULTADOS SOBRE MATERIA SECA O SOBRE PRODUCTO TOTAL

2.5.-REFERENCIAS

1.-MINISTERIO DE AGRICULTURA, METODOS OFICIALES DE ANALISIS DE FERTILIZANTES, MADRID , 1974

2.-AFNOR, 1976, PRODUITS ORGANIQUES SUPPORTS ET MILIEUX DE CULTURE. NORMA U44-171

3(B).-MATERIA ORGANICA TOTAL (POR OXIDACION )

3(B).1.-PRINCIPIO

OXIDAR LA MATERIA ORGANICA EN CONDICIONES BIEN DEFINIDAS POR MEDIO DE UNA SOLUCION CONCENTRADA SULFO-CROMICA, VALORANDO EL EXCESO POR RETORNO

APLICABLE A TODOS LOS ABONOS QUE NO CONTENGAN MAS SUSTANCIAS REDUCTORAS QUE LA PROPIA MATERIA ORGANICA

3(B).2.-MATERIAL Y APARATOS

3(B).2.1.-ESTUFA REGULABLE A 105 GRADOS C

3(B).2.2.-BAÑO DE AGUA

3(B).2.2.-AGITADOR MAGNETICO

3(B).3.-REACTIVOS

3(B).3.1.-SOLUCION OXIDANTE, PESAR EXACTAMENTE 15 G.DE ANHIDRIDO CROMICO CRISTALIZADO Y DISOLVERLOS EN UN MATRAZ CON 34 CM3 DE AGUA DESTILADA. AÑADIR LENTAMENTE Y AGITANDO 165 CM3 DE SO4H2 (D = 1,84), HOMOGENEIZAR Y GUARDAR AL ABRIGO DE LA HUMEDAD

3(B).3.2.-SOLUCION VALORADA DE SULFATO FERROSO AMONICO N/5. PESAR 19.610 G DE SULFATO FERROSO-AMONICO CRISTALIZADO, COLOCARLOS EN UN MATRAZ AFORADO DE 250 CM3 Y DISOLVERLOS CON 150 CM3 DE SO4H2 PURO. AGITAR Y ENRASAR A 250 CM3 CON AGUA DESTILADA HERVIDA Y FRIA . ESTA SOLUCION DEBE ESTAR RECIENTEMENTE PREPARADA Y VALORADA PARA CADA SERIE DE MUESTRAS

3(B)3.3.-SOLUCION SULFURICA DE DIFENILAMINA . DISOLVER 0,5 G DE DIFENILAMINA EN POLVO, EN 200 CM3 DE AGUA DESTILADA . AÑADIR LENTAMENTE 100 CM3 DE SO4H2 (D = 1,84), HOMOGENEIZAR Y GUARDAR EN FRASCO TOPACIO

3(B).3.4.-FLUORURO DE SODIO PULVERIZADO

3(B).4. -PROCEDIMIENTO

PESAR EXACTAMENTE DE 100 A 500 MG DE MUESTRA PERFECTAMENTE TRITURADA Y HOMOGENEIZADA SEGUN EL CONTENIDO PREVISTO EN MATERIA ORGANICA QUE SE SOSPECHE TIENE EL PRODUCTO, DE ACUERDO CON LA TABLA SIGUIENTE :

(TABLA OMITIDA)

INTRODUCIR LA MUESTRA EXACTAMENTE PESADA EN UN TUBO DE ENSAYO DE 25 CM3 AYUDANDOSE CON UNA PIPETA QUE CONTENGA 10 CM3 DE SOLUCION OXIDANTE AÑADIENDO POCO A POCO PARA EVITAR UNA EBULLICION VIOLENTA. AGITAR SUAVEMENTE EL TUBO ASI PREPARADO, COLOCANDOLO EN UN BAÑO DE AGUA A EBULLICION

DESPUES DE MINUTO Y MEDIO DE INMERSION , TIEMPO NECESARIO PARA QUE LOS TUBOS ESTEN A LA TEMPERATURA DEL BAÑO, AGITAR, Y DEJAR EN REPOSO CINCO MINUTOS Y REPETIR ESTA OPERACION TRES VECES MAS

SACAR LOS TUBOS DEL BAÑO Y DEJAR ENFRIAR A LA TEMPERATURA AMBIENTE DURANTE 30 MINUTOS

TRASVASAR CUANTITATIVAMENTE EL CONTENIDO DEL TUBO A UN MATRAZ AFORADO DE DE 250 CM3 CON AYUDA DE AGUA DESTILADA ENFRIAR A TEMPERATURA AMBIENTE, ENRASAR Y HOMOGENEIZAR

TOMAR CON UNA PIPETA 50 CM3 DE LA SOLUCION ANTERIOR Y COLOCARLOS EN UN MATRAZ ERLENMEYER DE 250 CM3, AÑADIENDO 150 CM3 DE LA SOLUCION ANTERIOR Y COLOCARLOS EN UN MATRAZ ERLENMEYER DE 250 CM3, AÑADIENDO 150 CM3 DE AGUA DESTILADA, 2 G. DE FLUORURO SODICO Y 8 GOTAS DE SOLUCION DE DIFENILAMINA

VALORAR CON LA SOLUCION DE SULFATO FERROSO AMONICO AGITANDO CON AGITADOR MAGNETICO. EL COLOR VIRA LENTAMENTE DEL MARRON AL AZUL VIOLETA, A PUNTO DE EQUIVALENCIA QUEDA MARCADO POR EL PASO BRUSCO DEL AZUL VIOLETA AL VERDE

REALIZAR SIMULTANEAMENTE UN ENSAYO EN BLANCO

3(B).5.-CALCULO

(FORMULA OMITIDA)

3(B).6.-REFERENCIAS

1.-AFNOR, 1976. PRODUITS ORGANIQUES. SUPPORTS ET MILIEUX DE CULTURE. NORMA U44-161

5.-CENIZAS

5.1.-PRINCIPIO

CALCINACION DIRECTA A 540 GRADOS C

5.2.-MATERIAL Y APARATOS

5.2.1 .-CAPSULA O CRISOL

5.2.2.-BAÑO DE ARENA

5.2.3.-VARILLA DE VIDRIO DE BORDES REDONDEADOS

5.2.4.-MUFLA U HORNO ELECTRICO

5.2.5.-BALANZA DE PRECISION

5.2.6.-DESECADOR

5.3.-REACTIVOS

AGUA DESTILADA Y DESIONIZADA

5.4.-PROCEDIMIENTO

PESAR CON PRECISION DE 0,1 MG, 3-J GRAMOS DE LA MUESTRA PREPARADA SEGUN EL METODO OFICIAL N. 1 DESECANDO A 100-105 GRADOS C. ENFRIAR EN DESECADOR Y PESAR SOBRE CRISOL

INTRODUCIR EN LA MUFLA U HORNO MANTENIENDOLO DURANTE 3-4 HORAS A 540 GRADOS C. ENFRIAR HASTA TEMPERATURA AMBIENTE

A CONTINUACION LAVAR EL RESIDUO CON 2 ML DE AGUA DESTILADA Y DESIONIZADA, DISGREGANDO CON LA VARILLA DE CRISTAL. EVAPORAR EL AGUA EN EL BAÑO DE ARENA E INTRODUCIR NUEVAMENTE EN LA MUFLA

ESTA OPERACION SE REPETIRA HASTA CONSEGUIR CENIZAS BLANCAS TRAS LO CUAL SE ENFRIA EN DESECADOR Y SE PESA

EN CASO NECESARIO UTILIZAR UN ML DE ACIDO NITRICO PARA FACILITAR LA CALCINACION TOTAL

5.5.-CALCULOS

(FORMULA OMITIDA)

13.-FOSFORO TOTAL

13.1.-PRINCIPIO

TRATAR EL PRODUCTO ORGANICO CON UN ACIDO FUERTE PARA SOLUBILIZAR EL FOSFORICO Y PRECIPITAR CON ACIDO CLITROMOLITICO Y QUINOLEINA, RECOGIENDO Y PESANDO EL PRECIPITADO AMARILLO DE FOSFOMOLIBDATO , DEL QUE SE DEDUCE EL CONTENIDO EN P2O5

SE PUEDE PRECIPITAR CON UN REACTIVO UNICO DENOMINADO QUIMOCIACO, QUE CONTIENE LOS ACIDOS MOLIBDICO, CITRICO Y LA QUINOLEFNA

ES APLICABLE A TODOS LOS PRODUCTOS ORGANICOS FERTILIZANTES EN QUE SE PRECISA DETERMINAR LO QUE SE DENOMINA FOSFORICO TOTAL

13.2.-MATERIAL Y APARATOS

13.2.1.-FILTRO G-4 CON POROS DE 5 A 15 MICRAS DE DIAMETRO

13.2.2.-TROMPA DE VACIO

13.2.3 . PAPEL DE FIBRA DE VIDRIO

13.2.4.-REACTOR

13.3.-REACTIVOS

13.3.1 . ACIDO NITRICO CONCENTRADO

13.3.2.-ACIDO SULFURICO CONCENTRADO

13 .3.3.-NITRATO SODICO O POTASIO

13.3.4.-REACTIVO QUIMOCIACO, DISOLVER 70 G. DE MOLIBDATO SODICO DIHIDRATADO EN 10 CM3 DE AGUA. DISOLVER 60 G DE ACIDO CITRICO EN UNA MEZCLA DE 85 CM3 DE NO3H Y 150 CM3 DE AGUA Y ENFRIAR. AÑADIR GRADUALMENTE LA DISOLUCION MOLIBDICA A LA CITRICO-NITRICA AGITANDO.

DISOLVER 5 G DE QUINOLEINA SINTETICA EN UNA MEZCLA DE 35 CM3 DE ACIDO NITRICO Y 1000 CM3 DE AGUA. AÑADIR GRADUALMENTE ESTA DISOLUCION A LA MOLIBDICO CITRICONITRICA MEZCLANDO Y DEJANDO EN REPOSO VEINTICUATRO HORAS. FILTRAR, AÑADIR 280 CM3 DE ACETONA, DILUIR A UN LITRO CON AGUA Y MEZCLARLO. GUARDAR EN FRASCOS DE POLIETILENO

13.4.-PROCEDIMIENTO

PESAR 1 G DE MUESTRA EN UN MATRAZ DE 200 CM3 Y AÑADIRLE PRIMERO UNOS 5 CM3 DE ACIDO NITRICO Y DESPUES 20 A 30 CM3 DE ACIDO SULFURICO. DEJAR EN DIGESTION Y CALENTAR GRADUALMENTE EVITANDO LA REACCION VIOLENTA . AÑADIR 2 A 4 G DE NITRATO SODICO O POTASICO EN PEQUEÑAS PORCIONES , HERVIR, Y CUANDO LA DISOLUCION ESTE CASI INCOLORA, AÑADIR OTRA PEQUEÑA CANTIDAD DE NITRATO

CUANDO LA DISOLUCION ESTE DECOLORADA, ENFRIAR Y AÑADIR 150 CM3 DE AGUA, HIRVIENDO UNOS POCOS MINUTOS.

DEJAR ENFRIAR LA DISOLUCION Y TRANSFERIR A UN MATRAZ AFORADO DE 250 CM3. ENRASAR, MEZCLAR Y FILTRAR A TRAVES DE UN FILTRO SECO

EN UN ERLENMEYER DE 500 CM3, PIPETEAR UNA ALICUOTA DEL FILTRADO QUE NO CONTENGA MAS DE 25 MG DE P205 DILUIR A UNOS 100 CM3 CON AGUA, AÑADIR 50 CM3 DEL REACTIVO QUIMOCIACO, CUBRIR CON VIDRIO DE RELOJ, COLOCAR EN PLACA CALIENTE CON VITRINA BIEN VENTILADA Y HERVIR DURANTE UN MINUTO, ENFRIAR A TEMPERATURA AMBIENTE, AGITAR CUIDADOSAMENTE FORMANDO REMOLINOS TRES O CUATRO VECES DURANTE EL ENFRIAMIENTO

FILTRAR POR UN GOOCH CON PAPEL DE FILTRO DE FIBRA DE VIDRIO PREVIAMENTE DESECADO A 250 GRADOS C.Y TARADO, LAVAR CINCO VECES POR PORCIONES DE 25 CM3 DE AGUA

DESECAR EL CRISOL CON SU CONTENIDO A 250 GRADOS C. DURANTE TREINTA MINUTOS, ENFRIAR EN DESECADOR Y PESAR AL FOSFOMOLIBDATO DE QUINOLEINA (C9H7N)3 H3 (PO4, 12 MBO3)

EFECTUAR PARALELAMENTE UN ENSAYO EN BLANCO

13.5.-CALCULOS

(FORMULA OMITIDA)

13.6.-OBSERVACIONES

13.6.1.-EN LUGAR DE GOOCH Y PAPEL DE FIBRA DE VIDRIO PUEDE UTILIZARSE UN CRISOL FILTRANTE DE 5-15 MICRAS DE DIAMETRO DE POROS, TAL COMO UM G-4

13.6.2.-EN VEZ DE DESECAR EL PRECIPITADO A 250 GRADOS C

DURANTE MEDIA HORA PUEDE DESECARSE A 150 GRADOS C. DURANTE UNA NOCHE

13.6 .2.-EN VEZ DE DESECAR EL PRECIPITADO A 250 GRADOS C. DURANTE MEDIA HORA PUEDE DESECARSE A 150 GRADOS C. UNA NOCHE

13.6.3.-EL TIEMPO DE DIGESTION PUEDE REDUCIRSE UTILIZANDO UN REACTOR

13.7.-REFERENCIAS

1.-METODOS OFICIALES DE LA A.O.A.C. EDICION 1970, NUMS.2016 Y 2023 A 2025

2.-LOTTI, G. Y GALOPPINI, C. GUIDA ALLE ANALISIS CHIMICO AGRERIA , PAG. 359 <DETERMINAZIONE DELL ANIDRIDE FOSFORICA TOTALE (METODO OFFICIALE)>. BOLOGNA, 1967

16.-POTASIO SOLUBLE EN AGUA

(POR FOTOMETRIA DE LLAMA)

16.1.-PRINCIPIO

SE FUNDA EN LA COMPARACION DE LA MEDIDA DE INTENSIDADES DE EMISION DE ATOMOS EXCITADOS EN UNA LLAMA, DE UNA DISOLUCION PROBLEMA DESCONOCIDA Y DE UNA DISOLUCION PATRON DE CONCENTRACION CONOCIDA

PARA EVITAR INTERFERENCIAS, ELIMINAR LOS METALES PESADOS POR PRECIPITACION DE OXALATO AMONICO Y LOS ANIONES INTERFERENTES POR RETENCION MEDIANTE RESINAS CAMBIADORAS

SE APLICA A TODOS LOS PRODUCTOS ORGANICOS FERTILIZANTES

16.2.-MATERIAL Y APARATOS

16.2.1 .-MATRACES AFORADOS DE 250 Y 500 CM.3 DE CAPACIDAD

16.2.2.-COLUMNA DE CAMBIO IONICO. PUEDE UTILIZARSE COLUMNA DE VIDRIO DE CROMATOGRAFIA DE 30,5 CM. Y 1,9 CM. DE DIAMETRO INTERNO, CON LLAVE O VALVULA EN EL FONDO PARA CONTROLAR EL CAUDAL DEL LIQUIDO

16.2.3.-FOTOMETRO DE LLAMA

16.3.-REACTIVOS

16.3.1.-DISOLUCION DE OXALATO OMONICO. DISOLVER 40 G. DE C2O4 (NH4)2 EN UN LITRO DE H2O

16.3.2.-INDICADOR ROJO DE METILO: DISOLVER 0,2 G. DE ROJO DE METILO EN 10 ML. DE ALCOHOL

16.3.3 .-ACIDO NITRICO DILUIDO (1 + 10)

16.3.4.-UTILIZAR UNA RESINA DE CAMBIO DE BASICIDAD INTERMEDIA O DEBIL, TAL COMO AMBERLITA IR-48, DUOLITA A-7 O DUOLITA A-41 DE ACIDITA O PERMUATA 5 O EQUIVALENTE, PREPARADA COMO SIGUE: COLOCAR 450 G. DE RESINA EN VASO DE CUATRO LITROS Y AÑADIR DOS LITROS DE NAOH AL 5 POR 100. AGITAR TREINTA MINUTOS CON AGITADOR ELECTRONICO. DEJAR SEDIMENTAR LA RESINA Y DECANTAR LA DISOLUCION DE NAOH. REPETIR EL TRATAMIENTO CON NAOH AL 5 POR 100 DOS VECES MAS Y DECANTAR LA DISOLUCION DE NAOH DESPUES DEL TRATAMIENTO FINAL. AÑADIR DOS LITROS DE H2O A LA RESINA, AGITAR UNOS MINUTOS, DEJAR LA RESINA SEDIMENTAR Y DECANTAR AL H2O DE LAVADO. REPETIR TRES-CUATRO VECES . LA RESINA QUEDARA AHORA EN LA FORMA DE BASE LIBRE. REGENERAR A LA FORMA NO3 TRATANDO TRES VECES CON NO3H AL 5 POR 100 EN LA MISMA FORMA QUE COMO CON LA DISOLUCION DE NAOH. LAVAR LA RESINA CON H2O HASTA QUE EL AGUA DE LAVADO ALCANCE PH 2 O SUPERIOR MEDIANTE EL LAVADO POR RETROCESO EN LA COLUMNA O AGITANDO Y DECANTANDO EN UN VASO GRANDE . GUARDAR LA RESINA CUBIERTA DE H2O EN FRASCO TAPADO

16.3.5.-NITRATO O CLORURO POTASICO. RECRISTALIZAR DOS VECES A PARTIR DE H2O LA SAL DE GRADO REACTIVO Y DESECAR CINCO HORAS A 105 GRADOS CENTIGRADOS

16.3.6.-NO3LI

16.4.-PROCEDIMIENTO

16.4.1.-PREPARACION E LA COLUMNA : COLOCAR UN TACO DE LANA DE VIDRIO EN EL FONDO DE LA COLUMNA, CERRAR LA VALVULA Y AÑADIR H2O HASTA 10 CM. DE ALTURA. TRANSFERIR UNA PORCION DE RESINA A UN VASO DE 200 CM.3 Y SUSPENDER EN H2O. TRANSFERIR LA SUSPENSION A LA COLUMNA Y AJUSTAR LA ALTURA DE LA RESINA COMPACTA A 20 CM. DRENAR EL EXCESO DE H2O HASTA QUE QUEDA A 2,5 CM. DE LA PARTE SUPERIOR. REGENERAR LA RESINA DESPUES DE QUE SE HAYAN PASADO 10 ALICUOTAS SUCESIVAS, EXCEPTO CON AMBERLITA IR-4B CON LA QUE PUEDEN UTILIZARSE 20 ALICUOTAS. PARA EL NA, REGENERAR DESPUES DE HACER PASAR CINCO ALICUOTAS

16.4.2.-PREPARACION DE LA DISOLUCION PROBLEMA: PESAR UNA CANTIDAD DE MUESTRA QUE CONTENGA UNOS 15 MG. DE K2O AÑADIR 125 CM.3 DE H2O Y 50 CM.3 DE DISOLUCION C2O4 (NH4)2 Y HERVIR TREINTA MINUTOS. ENFRIAR, DILUIR HASTA VOLUMEN, MEZCLAR Y PASAR POR FILTRO SECO

16.4.3.-PREPARACION E LA CURVA PATRON: DISOLVER 1,2931 G. DE NO3K (O 0,9335 G. DE CIK) EN H2O Y DILUIR HASTA 500 CM.3 (1.000 P .P.M. DE K). PREPARAR LAS DISOLUCIONES PATRON POR DILUCION CUBRIENDO LOS LIMITES 0-50 P.P.M. DE K A INTERVALOS NO SUPERIORES A 10 P.P. M. Y AÑADIENDO LA CANTIDAD ADECUADA DE NO3LI SI VA A UTILIZARSE UN INSTRUMENTO CON PATRON INTERNO. PREPARAR LA CURVA PATRON DE EMISION FRENTE A CONCENTRACION AJUSTANDO EL INSTRUMENTO DE FORMA QUE 50 P .P.M. DE K DE LECTURAS PROXIMAS AL CENTRO DE LA ESCALA. ATOMIZAR PORCIONES DE DISOLUCIONES PATRON HASTA QUE LAS LECTURAS PARA LAS SERIES SEAN REPRODUCIBLES

16.4.4.-DETERMINACION. TRANSFERIR UNA ALICUOTA DE 10 CM.3 DE DISOLUCION DE LA MUESTRA A UN VASO DE 250 CM.3. AÑADIR UNA GOTA DE ROJO DE METILO Y NEUTRALIZAR CON NO3H (1 + 10). AJUSTAR EL NIVEL DE H2O EN LA COLUMNA HASTA LA PARTE SUPERIOR DE LA RESINA Y TRANSFERIR CUANTITATIVAMENTE LA ALICUOTA A LA COLUMNA, ABRIR LA LLAVE PARA OBTENER UNA PROPORCION DE FLUJO DE DOS GOTAS/SEG., RECOGER EL AFLUENTE EN MATRAZ AFORADO DE 250 CM3. LAVAR LA ALICUOTA DENTRO DE LA RESINA CON DOS-TRES PEQUEÑAS PORCIONES DE H2O. RECOGER 50-75 DE EFLUENTE, LUEGO ABRIR LA LLAVE Y RECOGER 100 CM.3 ADICIONALES VERTIENDO H2O EN LA COLUMNA, PROCURANDO QUE EL NIVEL DE H2O NO QUEDE POR DEBAJO DE LA PARTE SUPERIOR DE LA COLUMNA DE RESINA. DILUIR HASTA VOLUMEN Y MEZCLAR (SI SE UTILIZA INSTRUMENTO CON PATRON INTERNO, SE NECESITA AÑADIR LA CANTIDAD PRECISA DE NO3LI ANTES E DILUIR A VOLUMEN)

ATOMIZAR PORCIONES DE MUESTRA VARIAS VECES PARA OBTENER LECTURAS MEDIAS SEGURAS PARA CADA DISOLUCION. DETERMINAR LAS P.P. M. DE K A PARTIR DE LA CURVA PATRON. (LA TEMPERATURA DE LAS DISOLUCIONES PATRON Y DE LA MUESTRA NO DEBEN DIFERIR EN MAS DE 2 GRADOS CENTIGRADOS

PARA COMPROBAR, PESAR 1,5058 G. DE FTALATO ACIDO DE POTASIO (PATRON PRIMARIO) Y TRANSFERIR A UN MATRAZ AFORADO DE 250 ML. AÑADIR 0,5 G. DE PO4H (NHH (NH4)2 PROCEDER COMO EN 16.4.2. EMPEZANDO EN <AÑADIR 125 DE H2O... EL K2O CALCULADO DEBE SER IGUAL A 23,0

16.5.-CALCULOS

CALCULAR EL CONTENIDO EN K2O UTILIZANDO LA CORRESPONDIENTE CURVA PATRON

16.6.-OBSERVACIONES

LAS SALES DE 16.3.5. NO ES NECESARIO RECRISTALIZARLAS SI SE DISPONE DE UNA PUREZA DE GRADOS ESPECTROGRAFICOS

16.7.-REFERENCIAS

1.-METODOS DE ANALISIS. A.O.A.C. EDICION DE 1970, NUM. 2.084

2.- METODOS OFICIALES DE ANALISIS DE FERTILIZANTES, M. AGRICULTURA

ANEXO IX.-PLANTAS

1.-PREPARACION DE LA MUESTRA

1.1.-PRINCIPIO

LAS OPERACIONES DESCRITAS A CONTINUACION, TIENEN POR FINALIDAD CONSEGUIR UNA MUESTRA PARA EL ANALISIS LO MAS HOMOGENEA POSIBLE. POR ELLO, TODA SIMPLIFICACION O TRATAMIENTO INSUFICIENTE EN ESTA OPERACION, PUEDE CONDUCIR A UNOS RESULTADOS QUE NO SEAN REPRESENTATIVOS

1.2.-MATERIAL Y APARATOS

1.2.1 .-ESTUFA CON AIRE FORZADO

1.2.2.-BANDEJA DE FONDO POMO

1.2.3.-MOLINILLO DE AGATA O ASPAS METALICAS

1.2.4.-CEPILLO DE CERDA NATURAL SUAVE

1.3.-REACTIVOS

1.3.1.-SOLUCION AL 1 POR 100 DE UN DETERGENTE NO IONICO

1.4.-PROCEDIMIENTO

LAVAR LAS HOJAS CON SOLUCION 1.3.1. FROTANDO AMBAS CARAS CON 1.2.4. LAVAR A CONTINUACION DOS VECES CON AGUA CORRIENTE Y POR ULTIMO OTRAS DOS CON AGUA DESIONIZADA. TODO ESTE PROCESO E LAVADO NO DEBE SER SUPERIOR A 20-30 SEGUNDOS

ESTE TRATAMIENTO NO DEBE EFECTUARSE EN EL CASO DE QUE LA HOJA ESTE DESTINADA A LA REALIZACION DE DETERMINACIONES ANALITICAS QUE PERMITAN COMPROBAR UN TRATAMIENTO DE CONTAMINACION

A CONTINUACION DESECAR LAS HOJAS DEPOSITANDOLAS EN UNA BANDEJA DE FONDO POMO A 60 GRADOS CENTIGRADOS CON ESTUFA CON

AIRE FORZADO DURANTE EL TIEMPO NECESARIO PARA ALCANZAR PESO CONSTANTE (NORMALMENTE ENTRE 16-24 HORAS)

LA MUESTRA DESECADA, Y A SER POSIBLE EN CALIENTE, SE MUELE EN MOLINILLO DE AGATA O EN MOLINILLO DE ASPAS METALICAS, COMPROBANDO PREVIAMENTE LA POSIBLE CONTAMINACION, EL TAMAÑO DE LA MUESTRA DEBE SER LO SUFICIENTEMENTE GRANDE PARA QUE SEA REPRESENTATIVA

UNA VEZ REDUCIDA CONVENIENTEMENTE LA HOJA A POLVO, INTRODUCIRLA EN UN RECIPIENTE DE CIERRE HERMETICO, DESECANDOSE UNAS HORAS SIN TAPON Y CERRANDOSE EN CALIENTE PARA SU ALMACENAMIENTO

2.-NITROGENO

2.1.-PRINCIPIO

ATACANDO EL MATERIAL VEGETAL CON ACIDO SULFURICO CONCENTRADO, A EBULLICION, EN PRESENCIA DE UN CATALIZADOR, EL NITROGENO SE TRANSFORMA EN SULFATO AMONICO. SE DESTILA EN PRESENCIA DE UN EXCESO DE HIDROXIDO SODICO Y SE VALORA EL AMONIACO DESTILADO CON ACIDO SULFURICO N/14

2.2.-MATERIAL Y APARATOS

2.2.1.-EQUIPO NORMAL DE LABORATORIO NECESARIO PARA EFECTUAR UNA DIGESTION TIPO KJELDHAL Y SUBSIGUIENTE DESTILACION Y VALORACION

2.3.REACTIVOS

2.3.1.-ACIDO SULFURICO CONCENTRADO (D = 1,34)

2.3.2-ACIDO SULFURICO N/14

2.3.3.-LEJIA DE SOSA CAUSTICA 36 BE (265 G/L. DE NAOH, APROXIMADAMENTE)

2.3.4.-SULFATO POTASICO

2.3.5.-SULFATO CUPRICO ANHIDRO

2.3.6.-SELENIO PURO

2.3.7.-ROJO DE METILO

2.3.8.-VERDE DE BROMOCRESOL

2.3.9.-SOLUCION DE ACIDO BORICO AL 2 POR 100 EN AGUA

2.3.10.-CATALIZADOR: MEZCLAR 80 G. DE 2.3.4. ; 20 G. E 2.3.5. Y 2 G. DE 2.3.6

2.3.11.-INDICADOR: MEZCLAR VOLUMENES IGUALES DE ROJO DE METILO (0,66 POR 100) Y VERDE DE BROMOCRESOL ( 0,33 POR 100) EN ALCOHOL ETILICO DE 95 GRADOS

2.4.-PROCEDIMIENTO

INTRODUCIR EN UN MATRAZ DE 150 ML. DE CAPACIDAD, DE 150 A 200 MG. DE MUESTRA VEGETAL, PREPARADA SEGUN EL METODO OFICIAL N. 1, EVITANDO QUE SE DEPOSITE EN EL CUELLO EL MATRAZ. A CONTINUACION AGREGAR 5 ML . DE ACIDO SULFURICO CONCENTRADO; DEJAR EN CONTACTO MEDIA HORA

TRANSCURRIDO ESTE TIEMPO AGREGAR UNOS 200 MG. DE CATALIZADOR Y DESPUES DE HABER PUESTO DOS O TRES BOLITAS DE VIDRIO, CALENTAR ALGUNOS INSTANTES, SUAVEMENTE AL PRINCIPIO Y DESPUES LLEVAR A EBULLICION. LA DECOLORACION COMPLETA SE OBTIENE GENERALMENTE EN TREINTA MINUTOS, SIENDO LA DURACION TOTAL DEL CALENTAMIENTO UNA HORA

ENFRIAR Y AÑADIR, DE UNA SOLA VEZ , 30 ML. DE AGUA. EN EL MOMENTO DE DESTILAR, AÑADIR DE UNA SOLA VEZ 25 ML. DE LA LEJIA DE SOSA Y FIJAR EL MATRAZ AL APARATO DE ARRASTRE DE VAPOR

RECIBIR EL DESTILADO EN UN VASO DE 250 ML. CONTENIENDO 0,5 ML. DE INDICADOR Y 10 ML. DE ACIDO BORICO, TOCANDO LA EXTREMIDAD INFERIOR DEL REFRIGERANTE EL FONDO EL ASO. MANTENER LA DESTILACION DURANTE DOS MINUTOS Y MEDO A TRES MINUTOS, SIENDO EL VOLUMEN RECIBIDO DE 100 A 125 ML. VALORAR CON ACIDO SULFURICO M/14 (VIRAJE DE VERDE A ROJO)

2.5.-CALCULOS

CALCULAR EL % DE NITROGENO MDIANTE LA EXPRESION

%N=N/10.P

SIENDO:

N = VOLUMEN, EN ML., DE SOLUCION GASTADOS EN LA VALORACION

P = PESO, EN G., DE LA MUESTRA

1 ML. DE SOLUCION N/14 CORRESPONDE A 1 MG. DE N

2.6. REFERENCIAS

1.-METHODES DE REFERENCE POUR LA DETERMINATION DES ELEMENTS MINERAUX DANS LES VEGETAUX. COMITE INTER-INSTITUTS

COMUNICATION PRESENTEE 4. COLLOQUE INTERNATIONAL SUR LE CONTROLE D L'ALIMENTATION DES PLANTES CULTIVEES

ANEXO X.-SUELOS

9.-CAPACIDAD DE CAMBIO CATIONICO

9.1.-PRINCIPIO

EL SUELO SE SATURA DE SODIO MEDIANTE CUATRO LAVADOS SUCESIVOS CON ACETATO SODICO IN A PH 8,2. EL EXCESO DE SAL SE ELIMINA DEL SUELO Y EL SOCIO ABSORBIDO SE DESPLAZA CON ACETATO AMONICO 1N, EN CUYA SOLUCION SE DETERMINA EL SODIO

9.2.-MATERIAL Y APARATOS

9.2.1.-FOTOMETRO DE LLAMA O ESPECTROFOTOMETRO CON ACCESORIOS PARA FOTOMETRIA DE LLAMA

9.2.2.-AGITADOR MECANICO DE TUBOS DE CENTRIFUGA

9.2.3.-CENTRIFUGA Y TUBOS DE 50 ML

9.3.-REACTIVOS

9.3.1.-SOLUCION DE ACETATO SODICO, 1N. DISOLVER 136 G. DE ACETATO SODICO TRIHIDRATO EN AGUA Y DILUIR A UN LITRO. EL PH DE LA SOLUCION DEBE SER, APROXIMADAMENTE, 8,2

9.3.2.-ETANOS AL 95 POR 100 (V/V)

9.3.3.-SOLUCION DE ACETATO 1N, AJUSTADA A PH 7,0. AÑADIR, POR CADA LITRO DE SOLUCION QUE SE PREPARE, 57 ML. DE ACIDO GLACIAL A UNOS 600 ML. DE AGUA Y ENTONCES AÑADIR 68 ML. DE HIDROXIDO AMONICO CON CENTRADO , DE PESO ESPECIFICO 0,90. EL HIDROXIDO DEBE AÑADIRSE EN UNA VITRINA DE GASES A TRAVES DE UN EMBUDO DE CUELLO LARGO DE TAL MANERA QUE LLEGUE AL FONDO DE LA SOLUCION EL ACIDO. DEJAR ENFRIAR Y AJUSTAR A PH 7,0 CON ACIDO ACETICO O NH4OH, USANDO UN PH-METRO O INDICADOR AZUL DE BROMOTIMOL Y LLEVAR LA SOLUCION AL VOLUMEN CONVENIDO

9.4. PROCEDIMIENTO

PESAR, CON PRECISION DE 0,01 G., UNA MUESTRA DE 4-6 GRAMOS SEGUN TEXTURA. COLOCAR EN UN TUBO DE CENTRIFUGA Y AÑADIR 33 ML. DE ACETATO SODICO (9.3.1). AGITAR EL TUBO TAPADO DURANTE CINCO MUNUTOS EN EL AGITADOR MECANICO. DESTAPAR Y CENTRIFUGAR HASTA QUE EL LIQUIDO SOBRENADANTE ESTE CLARO. DECANTAR EL LIQUIDO SOBRENADANTE Y DESECHARLO. REPETIR EL TRATAMIENTO OTRAS TRES VECES MAS RESUSPENDIENDO EL SUELO ANTES DE CADA AGITACION. A CONTINUACION SUSPENDER LA MUESTRA EN 33 ML. DE ETANOL (9.3.2.) Y AGITAR EL TUBO TAPADO DURANTE CINCO MINUTOS; DESTAPAR, CENTRIFUGAR Y DECANTAR EL LIQUIDO CLARO QUE SOBRENADE . REPETIR EL TRATAMIENTO HASTA QUE LA CONDUCTIVIDAD ELECTRICA DEL ULTIMO LIQUIDO SOBRENADANTE SEA INFERIOR A 40 MILICROMHOS/CM. (TRES LAVADOS SUELEN SER SUFICIENTES)

DESPLAZAR EL SODIO ABSORBIDO POR LA MUESTRA TRATANDOLA DEL MISMO MODO, CON TRES PORCIONES DE 33 ML . DE ACETATO AMONICO (9.3.3.) DECANTANDO CADA PORCION DEL LIQUIDO SOBRENADANTE EN UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML., COMPLETANDO EL VOLUMEN CON ACETATO AMONICO (9.3.3.) Y HOMOGENEIZANDO

DETERMINAR LA CONCENTRACION DE SODIO EN EL EXTRACTO CONTENIDO EN EL MATRAZ DE ACUERDO CON EL METODO 14 (A) PARA EXTRACTOS DE ACETATO AMONICO

9.5.-CALCULO

CAPACIDAD DE CAMBIO (MEQ.-100 G.) = 10 . C / P

SIENDO

C = CONCENTRACION, EN MEQ/1, DE NA EN EL EXTRACTO

P = PESO, EN G., DE LA MUESTRA SECA

9.6 .-REFERENCIAS

1.-BOWER, C. A.: REITEMEIER, R. F. Y FIREMAN, M.: < EXCHANGEABLE CATION ANALYSIS OF SALINE AND ALKALI SOILS>, SOIL SS . 73: 251-261, 1952

11.-ACIDEZ VALORABLE DE LOS SUELOS

11.1.-PRINCIPIO

PERCOLACION DEL SUELO CON UNA SOLUCION 0,5N DE CLORURO BARICO Y 0,055 N DE TRIETANOLAMINA LLEVADA A PH 8 CON ACIDO CLORHIDRICO Y POSTERIOR VALORACION CON ACIDO CLORHIDRICO HASTA PH 5,1, COMPARANDO LA CANTIDAD CONSUMIDA CON LA UTILIZADA EN UN ENSAYO EN BLANCO

11.2 .-MATERIAL Y APARATOS

11.2.1.-MATRACES ERLENMEYER DE 125 Y 500 ML

11.2.2.-MATRAZ AFORADO DE 250 ML

11.2.3.-FILTRO BUCHNER NUM. 40

11.2.4.-RECIPIENTE RESISTENTE AL CALOR DE 10 LITROS

11.3.-REACTIVOS

11.3.1.-SOLUCION DE ACIDO CLORHIDRICO 0,2N

11,3.2.-SOLUCION INDICADORA : DISOLVER 0,22 G. DE ERDE DE BROMOCRESOL Y 0,075 G. DE ROJO DE METILO EN 3,5 ML. DE NAOH 0,1N, COMPLETANDO A 100 ML. CON ETANOL DEL 95 POR CIENTO (V/V)

11.3.3.-SOLUCION 2N DE TRIETANOLAMINA (TEA). DILUIR TEA COMERCIAL (N NCH2CH2OH)3 - PESO ESPECIFICO 1,126, APROXIMADAMENTE 8N) Y NORMALIZAR CON LA SOLUCION ACIDA (11.3.1.) Y INDICADOR (11.3.2 .)

11.3.4.-SOLUCION EXTRACTORA TAMPONADA: DISOLVER 550 G. DE CL2BA.2H2O EN AGUA DESTILADA Y HERVIDA EN UN RECIPIENTE DE 10 LITROS. AÑADIR 250 ML. DE TRIETANOLAMINA 2N Y 36 ML. DE ACIDO CLORHIDRICO 6N Y DILUIR LA SOLUCION EN UN TOTAL DE 9 LITROS CON AGUA DESTILADA Y HERVIDA. MEZCLAR BIEN LA SOLUCION Y AJUSTAR A PH 8,00 +- 0,02 CON ACIDO CLORHIDRICO O ETA. IMPEDIR LA DISOLUCION DE CO2 EN LA SOLUCION INSTALANDO UN SIFON Y UN TUBO CON CAL SODADA CONECTADOS A LA TOMA DE AIRE

11.4. -PROCEDIMIENTO

COLOCAR 10 G. DE SUELO EN UN MATRAZ ERLERMEYER DE 125 ML. Y AÑADIR 100 ML. DE LA SOLUCION EXTRACTORA (11.3.4.), REMOVER EL CONTENIDO PARA MEZCLAR BIEN, TAPAR EL MATRAZ Y DEJAR EN REPOSO UN MINIMO DE 8 H. TRANSFERIR EL CONTENIDO A UN FILTRO BUCHNER NUM . 40, CON PAPEL DE FILTRO WHATMAN NUM. 32 O SIMILAR (4,25 CM.) ENJUAGAR EL ERLENMEYER CON LA SOLUCION EXTRACTORA Y CONTINUAR PERCOLANDO ESTA SOLUCION A TRAVES EL SUELO QUE SE TENGA UN TOTAL DE PERCOLADO DE 225 ML. DEJAR DRENAR CADA FRACCION E LA SOLUCION EXTRACTANTE ANTES DE AÑADIR LA FRACCION SIGUIENTE, PERO EVITAR QUE EL SUELO SE AGRIETE DEBIDO A SECADO EXCESIVO. TRANSFERIR COMPLETAMENTE LA SOLUCION PERCOLANTE A UN MATRAZ AFORADO DE 250 ML. Y ENRASAR CON EL REACTIVO 11.3.4. A CONTINUACION VERTER EL CONTENIDO DEL MATRAZ EN UN ERLENMEYER DE 500 ML. AÑADIR 5 GOTAS DE SOLUCION INDICADORA (11.3.2.) Y VALORAR CON ACIDO CLORHIDRICO (11.3.1.) HASTA EL VIRAJE DE COLOR A ROSA ( PH = 5,1). ENJUAGAR EL MATRAZ CON LA SOLUCION QUE SE ESTE VALOANDO Y COMPLETAR LA VALORACION. VALORAR 250 ML. DE LA SOLUCION EXTRACTORA ORIGINAL HASTA EL MISMO PUNTO DE VIRAJE UTILIZANDO LA MISMA CANTIDAD DE SOLUCION INDICADORA

11.5.-CALCULOS

ACIDEZ VALORABLE (MEQ/100 G ) = (V-V') 10N

SIENDO

V = VOLUMEN, EN ML., DE CIDO CLORHIDRICO UTILIZADO PARA VALORAR 250 ML., DE LA SOLUCION EXTRACTORA

V' = VOLUMEN, EN ML., DE ACIDO CLORHIDRICO UTILIZADO PARA VALORAR 250 ML. DE LA SOLUCION EXTRACTORA QUE HA ESTADO EN CONTACTO CON EL SUELO

N = NORMALIDAD DEL ACIDO CLORHIDRICO

11.6.-REFERENCIAS

1.-PEECH, M.: <METHODS OF SOIL ANALYSIS>. PART 2: 910-912. AMERICAN SOCIETY OF AGRONOMY, 1965

2.-COLEMAN, N. T. Y THOMAS, G. W.: <SOIL ACIDITY AND LIMING>: 1-36 , AGRONOMY MON, NUM. 12. AMERICAN SOCIETY OF AGRONOMY, 1967

14.-SODIO POR FOTOMETRIA DE LLAMA

14.1.-PRINCIPIO

EXCITACION EL SODIO DE SOLUCIONES PULVERIZADAS SOBRE UNA LLAMA Y MEDIDA DE LA RADIACION EMITIDA, UTILIZANDO LITIO COMO PATRON INTERNO

14.2.-MATERIAL Y APARATOS

14.2.1.-MATRACES AFORADOS DE 50 ML

14.2.2.-FOTOMETRO DE LLAMA

14.3.-REACTIVOS

14.3.1 .-SOLUCION DE ACETATO AMONICO 1N, AJUSTADA A PH 7,0: POR CADA LITRO DE SOLUCION QUE SE PREPARE AÑADIR 57 ML. DE ACIDO ACETICO GLACIAL A UNOS 600 ML. DE AGUA Y ENTONCES AÑADIR 68 ML. DE HIDROXIDO AMONICO CONCENTRADO DE PESO ESPECIFICO 0,90. EL HIDROXIDO DEBE AÑADIRSE EN VITRINA DE GASES A RAVES DE UN EMBUDO DE CUELLO LARGO DE TAL MANERA QUE LLEGUE AL FONDO DE LA SOLUCION DEL ACIDO. DEJAR ENFRIAR Y AJUSTAR A PH 7,0 CON ACIDO ACETICO O HIDROXIDO AMONICO, USANDO UN PH-METRO O INDICADOR AZUL DE BROMOTIMOL. DILUIR LA SOLUCION AL VOLUMEN CONVENIDO

14.3.2.-SOLUCION DE CLORURO SODICO 0,04N. DISOLVER EN AGUA 2,338 G. DE CLORURO SODICO Y COMPLETAR A 1 LITRO

14.3.3.-SOLUCION DE CLORURO SODICO 0,04N EN ACETATO AMONICO 1N. DISOLVER EN EL REACTIVO 14.3.1 . 2,338 G. E CLORURO SODICO COMPLETAR A UN LITRO

14.3.4.-SOLUCION DE CLORURO DE LITIO 0,05N.DISOLVER EN AGUA 2,12 G. DE CLORURO DE LITIO Y COMPLETAR A 1 LITRO

14.4.-PROCEDIMIENTO

PREPARAR UNA SERIE DE PATRONES DE CLORURO SODICO USANDO LOS REACTIVOS 14.3.2 Y 14.3.4 .AÑADIENDO A CADA UNO LA MISMA ALICUOTA DE LA SOLUCION 14.3.4. PREPARAR UNA SERIE SIMILAR DE PATRONES DE CLORURO SODICO CON LOS REACTIVOS14.3.3 . Y 14.3.4 USANDO EL REACTIVO 14.3.1. EN VEZ DE AGUA PARA DILUIR. LAS CONCENTRACIONES DE CLORURO SODICO QUE SE RECOMIENDAN SON 0; 0,2 ; 0,6; 0,8; 1; 2; 3 Y 4 MEQ/1. LA CONCENTRACION OPTIMA DE CLORURO DE LITIO VARIA CON EL TIPO DE FOTOMETRO DE LLAMA PERO GENERALMENTE ES DE 5 A 10 MEQ/1. LOS PATRONES DE CLORURO SODICO EN AGUA SE USAN PARA ANALISIS DEL SODIO EN AGUAS Y EN EXTRACTOS ACUOSOS DE SUELOS . LOS PATRONES DE CLORURO SODICO EN ACETATO AMONICO SE USAN PARA ANALISIS DEL SODIO EN EL EXTRACTO DE CETATO AMONICO DEL SUELO. CALIBRAR EL FOTOMETRO PARA UN INTERVALO DE CONCENTRACIONES ENTRE 0 Y 1 MEQ/1 DE SODIO, USANDO LAS CINCO PRIMERAS SOLUCIONES PATRONES, USAR LA PRIMERA Y LAS CUATRO ULTIMAS SOLUCIONES PATRONES CUANDO SE VAYA A TRABAJAR EN EL INTERVALO DE 0 A 4, MEQ/1 DE SODIO

MEDIR CON PIPETA UNA ALICUOTA DE LA SOLUCION QUE SE VA A ANALIZAR EN UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML.; LA ALICUOTA DEBE DE CONTENER MENOS DE 0,2 MEQ/1 DE SODIO . AÑADIR EL VOLUMEN APROPIADO DEL REACTIVO 14.3.4. DE FMODO QUE CUANDO SE DILUYA A UN VOLUMEN DE 50 ML. LA CONCENTRACION DE LITIO SEA EXACTAMENTE IGUAL A LA DE LAS SOLUCIONES PATRON DE CLORURO SODICO

ENRASAR AÑADIENDO AGUA O REACTIVO 14.3.1. SI VAN A ANALIZARSE EXTRACTOS DE ACETATO AMONICO. MEZCLAR Y DETERMINAR LA CONCENTRACION DE SODIO CON EL FOTOMETRO DE LLAMA USANDO LA CURVA DE CALIBRACION APROPIADA

14.5.-CALCULO

CALCULAR EL CONTENIDO EN SODIO EN AGUA O EXTRACTO DEL SUELO EXPRESADO EN MEQ/1 APLICANDO LA SIGUIENTE FORMULA:

SODIO (MEQ/1) = C / V X 50

SIENDO :

C = CONCENTRACION, EN MEQ/1, E SODIO HALLADA EN LA CURVA DE CALIBRACION

V = VOLUMEN, EN ML, DE LA ALICUOTA DE LA SOLUCION A ANALIZAR

14.6 .-REFERENCIAS

1.-DIAGNOSTICO Y REHABILITACION DE SUELOS SALINOS Y SODICOS. PERSONAL DEL LABORATORIO DE SALINAS DE LOS EE.UU. 1973. ED. LIMUSA. MEXICO

ANEXO XI.-VINOS

3(A).-COLOR

3(A).1.-PRINCIPIO

EL COLOR DE LOS VINOS SE DETERMINA POR TRANSPARENCIA COMO SE PERCIBE POR LA VISTA, PERO POR UN PROCEDIMIENTO INDEPENDIENTE DE LA APRECIACION PERSONAL, VALIENDOSE DE METODOS ESPECTROFOTOMETRICOS TRIESTIMULARES DE ORDENADAS SELECCIONADAS DE HARDY, FUNDADO EN EL SISTEMA DE LA COMMISION INTERNATIONALE DE L'ECHAIRAGE (C.I.E.), CON RELACION A LUZ PRODUCIDA POR UN CIELO NUBLADO (FUENTE C)

3.(A).2.-MATERIAL Y APARATOS

3(A)2.1.-ESPECTROFOTOMETRO PARA MEDIDA EN EL ESPECTRO VISIBLE .LOS VALORES DE TRANSMITANCIA CORRESPONDIENTES A UNA MISMA MUESTRA , NO DEBEN ACUSAR DIFERENCIAS SUPERIORES A 0,005 Y CUDNDO LA ESCALA DEL APARATO ESTA GRADUADA EN VALORES DE TRANSMITANCIA MULTIPLICADOS POR 100, NO DEBE HABER DIFERENCIA SUPERIORES A 0,5

LAS CUBETAS SERAN DE CUARZO O DE VIDRIO DE INDICE DE REFRACCION MXIMO 1,5, DE PAREDES PARALELAS Y ESPESOR INTERNO B QUE SE EXPRESA EN CENTIMETROS Y CON UNA APROXIMACION DE +- 0,002.B

CONVIENE DISPONER DE CUATRO PARES DE CUBETAS EN LAS QUE LOS ESPESORES B, SEAN DE 0,1 CM.; 0,2 CM9; 0,5 CM Y 1 CM

SEGUN LA INTENSIDAD DEL COLOR SE ESCOGERAN UN PAR DE CUBETAS DE TAL FORMA QUE LA ABSORBANCIA A QUEDE COMPRENDIDA ENTRE 0,3-0,7 (TRANSMITANCIA 0,5-0,2)

3(A).3.-PROCEDIMIENTO

SI EL VINO NO ESTA LIMPIO CENTRIFUGAR PREVIAMENTE. ELIMINAR EL S ARBONICO, SI ES NECESARIO, POR AGITACION CON VACIO PARCIAL

MEDIR DIRECTAMENTE CON EL ESPECTROFOTOMETRO LAS TRANSMITANCIAS DEL VINO A LAS CUATRO LONGITUDES DE ONDA = 625, 550,495 Y 445 NM., EMPLEANDO LA CUBETA DE ESPESOR CONVENIENTE, SEGUN INTENSIDAD DEL COLOR DEL VINO

3(A).4 .-CALCULOS

UTILIZAR AGUA DESTILADA COMO LIQUIDO DE REFERENCIA

3(A).4.1.- CALCULAR LAS COORDENADAS (X,Y) DEL PUNTO REPRESENTATIVO DEL COLOR DEL VINO EN EL DIAGRAMA TRICROMATICO DE LA C.I.E.

(FORMULAS OMITIDAS)

COMO LOS ESPECTROFOTOMETROS ESTAN GENERALMENTE GRADUADOS TANTO EN TRANSMITANCIA T COMO EN ABSORBANCIAS A, SE PUEDE TAMBIEN CALCULAR LA TRANSMITANCIA EN 1 CM. DE ESPESOR DEL VINO A PARTIR DE LA ABSORBANCIA OBSERVADA EN EL ESPESOR B, SI LA MEDIDA SE HA HECHO EN CUBETA DE ESPESOR INFERIOR A 1 CM., TENIENDO EN CUENTA QUE:

A = LOG 1 / T

CON ESTE FIN, SE CALCULAN LAS ABSORBANCIAS A EN UN CM. DE ESPESOR MULTIPLICANDO RESPECTIVAMENTE POR 2,5 Y 10 LAS ABSORBANCIAS LEIDAS EN UN ESPESOR B DE 0,5, 0,2 Y 0,1 CM. SE OBTIENEN DESPUES LOS VALORES CORRESPONDIENTES DE TRANSMITANCIA APLICACION DE LA RELACION ANTERIOR, BIEN REFIRIENDOSE A LA TABLA ALCULADA A PARTIR DE ESA MISMA RELACION

3(A).4.2.-LUMINOSIDAD RELATIVA.-ES EL VALOR DE Y, EXPRESADO EN PORCENTAJE (SIENDO EL NEGRO Y = 0 Y EL INCOLORO Y = 100)

3(A).4.3.-CROMATICIDAD.-PARA EXPRESAR AL CROMATICIDAD (LONGITUD DE ONDA DOMINANTE Y PUREZA) SE RECURRE AL DIAGRAMA DE CROMATICIDAD , QUE REPRESENTA EL <LOCUS> DE TODOS LOS COLORES DEL ESPECTRO, CONSIDERANDO QUE A 400 NM. CORRESPONDE EL AZUL, A 520 NM. CORRESPONDE EL VERDE Y A 700 NM. EL ROJO. EL PUNTO 0 CORRESPONDE A LA FUENTE LUMINOSA UTILIZADA , QUE, EN ESTE CASO, ES EL ILUMINANTE STANDARD Q, QUE REPRESENTA LA LUZ DE UN DIA MEDIANAMENTE CLARO Y CUYAS COORDENADAS SON:

X0 =0,3101 E Y0 = 0,3163

3(A)4.4.-LONGITUD DE ONDA DOMINANTE.-CONOCIDAS LAS COORDENADAS X E Y DEL COLOR, SE UNE EL PUNTO DE ESAS COORDENADAS C AL PUNTO 0. EN EL PUNTO EN EL QUE ESTA RECTA CORTA AL <SPECTRUM LOCUS> SE ENCUENTRA LA LONGITUD DE ONDA DOMINANTE QUE CORRESPONDE EL MATIZ DE ESTE COLOR. ASI EN EL CASO DE VINOS DE TONO TEJA, LA LONGITUD DE ONDA DOMINANTE SE SITUA ENTRE 585 Y 598 NM. APROXIMADAMENTE .PARA LOS VINOS DE UN COLOR TINTO FRANCO, SE SITUA ENTRE 599 Y 650 NM., MIENTRAS QUE PARA LOS VINOS DE TONO ROJO PURPURA ESTA CARACTERIZADA POR LA LONGITUD DE ONDA DOMINANTE DE COLOR COMPLEMENTARIO. SE OBTIENE EL VALOR DE ESTA LONGITUD DE ONDA PROLONGANDO LA RECTA EN LA DIRECCION DE C HACIA 0 PARA QUE ELLA CORTE EL <SPECTRUM LOCUS> COMO HEMOS VISTO ANTES

ESTE COLOR COMPLEMENTARIO EN EL CASO DE VINOS DE TONO ROJO PURPURA SE SITUA EN EL VERDE. SE ANOTA EL VALOR DE ESTA LONGITUD DE ONDA SEGUIDA DE C (COMPLEMENTARIO), POR EJEMPLO 495 C

3(A.4.5. .-PUREZA.-LA PUREZA SE CALCULA DETERMINANDO LA DISTANCIA RELATIVA DEL PUNTO C QUE REPRESENTA EL COLOR DEL VINO EXAMINADO Y EL PUNTO QUE CORRESPONDE AL <SPECTRUM LOCUS> AL PUNTO 0 QUE REPRESENTA AL ILUMINANTE

SE EXPRESA LA PUREZA EN PORCENTAJE POR LA RELACION:

(FORMULA OMITIDA)

3(A).5.-OBSERVACIONES

3(A).5.1.-EL COLOR DE UN VINO QUEDA COMPLETAMENTE DEFINIDO POR LA LUMINOSIDAD RELATIVA Y EN PORCENTAJE Y LAS COORDENADAS TRICOMETRICAS X E Y

SE PUEDEN PREVER LAS CARACTERISTICAS CROMATICAS DE UNA MEZCLA DE VARIOS VINOS CUANDO SE CONOCEN LAS CARACTERISTICAS CROMATICAS DE LA MISMA. LOS VALORES TRIESTIMULANTES X, Y, Z DE LA MEZCLA SE OBTIENEN POR LA SUMA DE ESOS VALORES MULTIPLICADOS POR SU PROPORCION PARA CADA CONSTITUYENTE

(TABLA Y FIGURAS OMITIDAS)

51.-PRESION DEL ANHIDRIDO CARBONICO

51.1.-PRINCIPIO

MEDIDA DE LA PRESION GASEOSA DE UN RECIPIENTE CERRADO HERMETICAMENTE MEDIANTE UN APARATO ADECUADO QUE DISPONGA DE UN MANOMETRO

51.2.-MATERIAL Y APARATOS

51.2.1.-EQUIPO MANOMETRICO QUE CONSTE DE LAS SIGUIENTES PARTES:

51.2.1.1.-AGUJA PERFORADORA DEL TAPON O DEL RECIPIENTE, HUECA, CON VALVULA QUE OBTURE EL ORIFICIO DE ENTRADA DE GAS A LA MISMA Y SISTEMA ESTANCO DE ADAPTACION AL TAPON O RECIPIENTE

51.2.1.2.-CONDUCTO QUE PONGA EN COMUNICACION LA AGUJA CON EL MANOMETRO

51.2.1.3.-MANOMETRO QUE PERMITA LECTURAS DE HASTA 10 KG/CM2

51.3.-PROCEDIMIENTO

MANTENER LA MUESTRA EN REPOSO DURANTE DOS HORAS AL MENOS. LLEVAR LA TEMPERATURA APROXIMADAMENTE A 20C Y PERFORAR EL TAPON O RECIPIENTE SEGUN EL CASO. ABRIR LA VALVULA CON LO QUE EL GAS PASA AL MANOMETRO. LEER LA PRESION QUE INDICA EL MANOMETRO

51.4.-EXPRESION DE LOS RESULTADOS

LA PRESION SE EXPRESARA EN ATMOSFERA A 20 GRADOS C

1 ATM-760 MM. DE HG = 1.304 KG/CM2

52.-ANTISEPTICOS Y ANTIFERMENTOS

(METODO MICROBIOLOGICO)

52.1.-PRINCIPIO

COMPARACION DEL DESARROLLO, EN VINO PROBLEMA Y TESTIGO, DE LAS LEVADURAS CONTENIDAS EN LAMINAS DE AGAR-EXTRACTO GLUCOSADO, TRAS PERMANECER SUMERGIDAS EN 48 HORAS EN ELLOS

52.2.-MATERIAL Y APARATOS

52.2.1.-HEMATIMETRO

52.2.2.-CAJAS PETRI

52.2.3.-PORTAOBJETOS RAYADOS EN ZIG-ZAG

52.2.4

VARILLA EN FORMA DE U DE UNOS 0,5 CM. DE DIAMETRO

52.2.5.-TUBOS DE ENSAYO AFORADOS A 10 ML

52.2.6.-TUBOS CAPACES DE CONTENER PORTAOBJETOS NORMALES DE MICROSCOPIA

52.2.7.-AUTOCLAVE

52.2.8.-MICROSCOPIO

52.2.9.-ESTUFA DE CULTIVO

52.3.-REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO

52.3.1.-SOLUCION ACUOSA DE ETANAL DE 6,9G/L (UN ML. DE ESTA SOLUCION COMBINA 10 MG DE SO2)

52.3.2.-MOSTO DE 10GRADOS BE PEPTONADO AL 1 POR 100. ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE A 112C DURANTE 20 MINUTOS

52.3.3.-AGAR-EXTRACTO DE LEVADURA GLUCOSA:

EXTRACTO DE LECADURA 5 G

GLUCOSA 20 G

AGAR-17,5 G

AGUA DESTILADA 1.000 G

UNA VEZ FUNDIDO EN BAÑO DE AGUA, DISTRIBUIR A RAZON DE 10 ML, POR TUBO Y ESTERILIZAR A 120 GRADOS C DURANTE 20 MINUTOS

52.3.4.-CEPA DE LEVADURA: SACCHAROMYCES BAYANUS

52.4.-PROCEDIMIENTO

52.4.1.-PREPARACION DEL VINO PROBLEMA : SI LA DOSIS DE SO2 LIBRE ES SUPERIOR A 15 MG/L., PROCEDER A COMBINACON DEL EXCESO MEDIANTE LA SOLUCION ACUOSA DE ETANAL, DEJANDO TRANSCURRIR 24 HORAS, DESDE SU ADICION. COMPROBAR DE NUEVO QUE EL CONTENIDO DE SO2 LIBRE ES INFERIOR A 15M/L

52.4.2.-PREPARACION DEL VINO TESTIGO : UTILIZAR UN VINO DE CARACTERISTICAS LO MAS PARECIDAS POSIBLES AL VINO PROBLEMA, ESPECIALMENTE EN GRADO ALCOHOLICO. RESPECTO AL SO LIBRE SE PROCEDERA COMO EN 52.4.1

52.4.3.-SIEMBRE DEL AGAR Y FORMACION DE LA PELICULA: UNA VEZ FUNDIDOS EN BAÑO DE AGUA LOS TUBOS CON 10 ML. DE AGAR-EXTRACTO DE LEVADURA GLUCOSADO Y CUANDO LA TEMPERATURA BAJA A 45-50C, SEMBRAR TRAS CONTEO CON HEMATIMETRO, 5 MILLONES DE LEVADURAS/ML. (50 MILLONES POR TUBO) DE UN CULTIVO DE 72 HORAS EN MOSTO PETONADO DE 10 BE

TRAS HOMOGENEIZAR RAPIDAMENTE LOS TUBOS SEMBRADOS , VERTER SU CONTENIDO SOBRE LOS PORTAOBJETOS RAYADOS, SITUADOS EN POSICION INCLINADA, APOYADOS SOBRE UN BRAZO DE LA VARILLA EN U COLOCADA DENTRO DE LA CAJA PETRI; EL AGAR FUNDIDO DESLIZARA UNIFORMEMENTE SOBRE LA SUPERFICIE DE CADA PORTAOBJETO, FORMANDO UNA LAMINA DE AGAR. ACTO SEGUIDO COLOCAR HORIZONTALMENTE LOS PORTAOBJETOS APOYANDO SOBRE LOS DOS BRAZOS DE LA VARILLA EN U Y DEJAR EN REPOSO DURANTE UN PAR DE HORAS

52.4.4.-FORMACION DE COLONIAS: ASEGURADA LA SOLIDIFICACION DEL MEDIO SEMBRADO, SUMERGIR COMPLETAMENTE LOS PORTAOBJETOS EN LOS TUBOS QUE CONTIENEN EL VINO PROBLEMA Y EL VINO TESTIGO. TAPAR NO HERMETICAMENTE LOS TUBOS Y MANTENER EN LA ESTUFA DE CULTIVO A 25 GRADOS C DURANTE 48 HORAS

FINALIZADO ESTE PERIODO ELIMINAR EL VINO DE LOS TUBOS, DEJANDO LOS PORTAOBJETOS EN EL INTERIOR DE ELLOS EN CONTACTO CON EL AIRE Y A 25 GRADOS C

52.4.5.-OBSERVACION MICROSCOPICA: OBSERVAR LAS LAMINAS INMEDIATAMENTE DESPUES DE SACADAS DEL VINO. SI NO SE APRECIA DESARROLLO DE COLONIAS INCUBAR EN ESTUFA A 25 GRADOS C Y REPETIR LA OBSERVACION MICROSCOPICA A LAS 24, 48 Y 72 HORAS SI ES NECESARIO

EN LOS VINOS DE ALTO GRADO ALCOHOLICO PUEDE RETRASARSE AUN MAS EL DESARROLLO DE LAS COLONIAS, COMO SE COMPRUEBA EN EL VINO TESTIGO

52.5.-INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

LA PRESENCIA FRANCA DE COLONIAS INDICA LA AUSENCIA DE ANTISEPTICOS Y ANTIFERMENTOS

52.6.-REFERENCIAS

1.-METODO BIOLOGICO ESPAÑOL-ARGENTINO PARA LA INVESTIGACION DE LA PRESENCIA DE ANTISEPTICOS EN LOS VINOS. E. FEDUCHY AN. INIA. SERV. TECNOL. AGR. N 2. 1975

VINAGRE

17.-ACIDO ACETICO DE SINTESIS

17.1.-PRINCIPIO

SEPARACION DEL ACIDO ACETICO MEDIANTE EXTRACCION CON ETER ISPROPILICO Y MEDIDA DE SU CONTENIDO EN C14 MEDIANTE ESPECTROFOTOMETRIA DE CENTELLO LIQUIDO

17.2.-MATERIAL Y APARATOS

17.2.1.-PIPETA AUTOMATICA DE 100 MICROL.

17.2.2.-PIPETA AFORADA DE 10 ML

17.2.3.-VIALES PARA CONTEO, DE VIDRIO CON BAJO CONTENIDO EN POTASIO , DOTADOS DE UN SISTEMA DE CIERRE DE MATERIAL PLASTICO PARA EVITAR EL ATAQUE DEL ACIDO ACETICO

17.2.4.-EXTRACTOR LIQUIDO-LIQUIDO EN CONTINUO, CON CAPACIDAD PARA 2 LITROS DE MUESTRA Y 3,5 LITROS DE DISOLVENTE ORGANICO

17.2.5.-COLUMNA RECTIFICADA DE 1 CM. DE LONGITUD Y 3 CM. DE DIAMETRO INTERNO, RELLENA DE ANILLOS RASCHING (O,7 X 1,4 ) CON CAMISA DE AISLANTE CERRADA AL VACIO

17.2.6.-COLUMNA DE DESTILACION FRACCIONADA DE 40 CM. DE LONGITUD Y 3 CM. DE DIAMETRO INTERNO, RELLENA DE ANILLOS RASCHING (0,7 X 0,4 CM.) CON CAMISA AISLANTE CERRADA AL VACIO Y LLAVE DE SALIDA A LOS 20 CM

17.2.7.-ESPECTROFOTOMETRO DE CENTELLEO LIQUIDO

17.3.-REACTIVOS

17.3.1.-ETER ISOPROPILICO

17.3.2 ACIDO ACETICO DE SINTESIS CON RIQUEZA SUPERIOR AL 96 POR 100

17. 3.3.-TOLUENO MARCADO CON C14

17.3.4.-SOLUCION DE 8 G/L. DE BUTIL PBD EN TOLUENO PARA CENTELLEO

17.4.-PROCEDIMIENTO

17.4.1.-EXTRACCION Y PURIFICACION DEL ACIDO ACETICO

EXTRAER 2 LITROS DE VINAGRE DE 5 GRADOS ACETICOS (O LA CANTIDAD CORRESPONDIENTE SI SE TRATA DE VINAGRES DE OTRA GRADUACION) EN CONTINUO CON 3,5 LITROS DE ETER ISOPROPILICO DURANTE 24 HORAS AL MENOS CON LO QUE SE OBTIENE UN EXTRACTO QUE DEBE CONTENER APROXIMADAMENTE EL 70 POR 100 DE ACIDO ACETICO PRESENTE EN EL VINAGRE

ELIMINAR EL DISOLVENTE POR DESTILACION EN LA COLUMNA 17.2.5 Y RECTIFICAR EL RESIDUO EN LA COLUMNA 17.2.5. RECOGER, POR LA SALIDA SITUADA EN EL CENTRO DE LA COLUMNA, LA FRACCION QUE DESTILA A 114 DESPRECIANDO LAS PRIMERAS GOTAS DEL DESTILADO. EL DESTILADO DEBE TENER UNA RIQUEZA DE ACIDO ACETICO MAYOR DEL 95 POR 100 EN PESO

17.4.2.-MEDIDA ESPECTROFOTOMETRICA

17.4.2.1.-FONDO: EN UN VIAL SE INTRODUCEN 10,5 H. DE ACIDO ACETICO DE SINTESIS Y 10 ML DE LIQUIDO DE CENTELLEO (17.3.4)

17.4.2.2.-MUESTRA PROBLEMA: INTRODUCIR, EN LOS VINOS DE CONTEO, 10,5 G. DE CADA DESTILADO Y 10 ML DE LIQUIDO DE CENTELLO (17.3.4). PREPARAR AL MENOS 2 VIALES POR CADA MUESTRA PROBLEMA Y UNO PARA EL FONDO DE ACETICO DE SINTESIS . CADA VIAL SE LEE 300 MINUTOS COMO MINIMO

UNA VEZ EFECTUADO EL CONTEO AÑADIR A CADA VIAL UN VOLUMEN DE PATRON INTERNO (17.3.3) QUE DE APROXIMADAMENTE 40.000 DPM. Y CONTAR DURANTE 4 MINUTOS

7.5.-CALCULOS

(FORMULAS OMITIDAS)

ALCOHOLES

2.-BASES NITROGENADAS

2.1.-PRINCIPIO

FIJACION DEL AMONIACO Y LAS BASES NITROGENADAS MEDIANTE ACIDO FOSFORICO, SEGUIDA DE UNA PRIMERA DESTILACION .LIBERACION DEL AMONIACO Y LAS BASES NITROGENEDAS CON HIDROXIDO SODICO , SEGUNDA DESTILACION Y POSTERIOR VALORACION CON ACIDO CLORHIDICO DEL SEGUNDO DESTILADO

2.2.-MATERIAL Y APARATOS

2.2.1.-MATRAZ DE 200 ML DE CAPACIDAD

2.3.-REACTIVOS

2.3.1.-ACIDO FOSFORICO D-1,34

2.3. 2.-SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO AL 10 POR 100

2.3.3.-SOLUCION DE ACIDO CLORHIDICO 0,01N

2.3.4.-SOLUCION DE ROJO DE METILO

2.4.-PROCEDIMIENTO

EN UN MATRAZ DE 200 ML, INTRODUCIR 50 ML DE ALCOHOL, ADICIONAR 41 ML DE AGUA Y DOS GOTAS DE ACIDO FOSFORICO; DESTILAR Y DESECHAR LOS PRIMEROS 80 ML. ENFRIAR EL MATRAZ Y AL RESIDUO FRIO ADICIONAR 2 ML DE SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO AL 10 POR 100 (O 20 ML DE SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO AL 1 POR 100 SI HAY PROYECCIONES). DESTILAR DE NUEVO RECOGIENDO ALREDEDOR DE 7 ML DE DESTILADO EN UN TUBO DE ENSAYO , EN EL QUE PREVIAMENTE SE HAN INTRODUCIDO 2 ML DE AGUA Y UNA GOTA DE SOLUCION DE ROJO DE METILO, PROCURANDO QUE EL DESTILADO CAIGA EN EL FONDO DEL TUBO CON LA AYUDA DE UNA ALARGADERA. VALORAR A CONTINUACION CON SOLUCION DE ACIDO CLORHIDICO 0,01N HASTA QUE EL INDICADOR VIRE A ROJO

2.5.-CALCULOS

NITROGENO (MG DE NITROGENO/LITRO DE ETANOL) = 280 N/A

SIENDO:

A = GRADO ALCOHOLICO DE ALCOHOL

N = VOLUMEN, EN ML, DE SOLUCION DE ACIDO CLORIHIDICO 0,01N GASTADOS EN LA VALORACION

2.6 .-REFERENCIAS

1.-CODEX OENOLOGIQUE INTERNATIONAL, O.I.V., 1978, PAG . 17

3.-GRADO ALCOHOLICO (METODO AREOMETRICO)

3.1.-PRINCIPIO

MEDIDA DIRECTA DEL GRADO MEDIANTE LA UTILIZACION DE UN ALCOHOMETRO

3.2.- MATERIAL Y APARATOS

3.2.1.-PROBETA CILINDRICA CUYAS DIMENSIONES MINIMAS SERAN DE 30 MM DE DIAMETRO INTERIOR Y 320 MM DE ALTURA

3.2.2.-TERMOMETRO CONTRASTADO, GRADUADO POR LO MENOS EN 0,1 GRADOS

3.2.3.-DISPOSITIVO QU EPERMITA MANTENER VERTICAL LA PROBETA

3.2.4.-ALCOHOMETRO GRADUADO EN DECIMAS, CON UNA SUSTANCIA MINIMA ENTRE DOS GRADOS CONSECUTIVOS DE 8 MM (MASA DEL AREOMETRO MAYOR DE 60 G). EL COEFICIENTE DE DILATACION CUBICA DEL VIDRIO EMPLEADO DEBE ESTAR COMPRENDIDO ENTRE 0,000020 Y 0,000025

3.3.-PROCEDIMIENTO

COLOCAR EN LA PROBETA LA CANTIDAD NECESARIA DE ALCOHOL. AGITAR PARA UNIFORMAR LA TEMPERATURA (QUE DEBERA SER LO MAS PROXIMA POSIBLE A LA DEL CALIBRADO DEL ALCOHOMETRO). UN MINUTO DESPUES DE HACER LA LECTURA DEL TERMOMETRO. RETIRAR EL TERMOMETRO , INTRODUCIR EL ALCOHOMETRO (QUE DEBERA ESTAR BIEN LIMPIO Y DESENGRASADO ) Y DESPUES DE UN MINUTO DE REPOSO HACER LA LECTURA DEL GRADO APARENTE SOBRE EL VASTAGO DEL ALCOHOMETRO. HACER AL MENOS TRES LECTURAS DEL GRADO ALCOHOLICO APARENTE, SIRVIENDOSE SI ES PRECISO DE UNA LUPA

3.4.-CALCULO

3.4.1.-EN EL CASO DE UTILIZAR ALCOHOMETROS DE 15 GRADOS C

CALCULAR EL GRADO ALCOHOLICO A 15 GRADOS C, UTILIZANDO LA TABLA I.

CALCULAR EL GRADO ALCOHOLICO A 20 GRADOS C, UTILIZANDO LA TABLA II, AÑADIENDO AL GRADO ALCOHOLICO APARENTE A 15 GRADOS C LA CORRECCION CORRESPONDIENTE

(TABLAS OMITIDAS)

ANEXO XII.-TOMA DE MUESTRAS

1.-TOMA DE MUESTRAS DE SUELOS

1.1.-OBJETO

EL OBJETO DE LA FORMA DE MUESTRAS ES OBTENER DE UN SUELO UNA MUESTRA REPRESENTATIVA DEL MISMO PARA PODER DETERMINAR A PARTIR DE ELLA SUS CARACTERISTICAS FISICAS Y QUIMICAS

1.2.-AMBITO DE APLICACION

ESTE METODO DE TOMA DE MUESTRAS SE APLICARA A TODOS LOS TIPOS DE MUESTREO DE SUELOS YA SEAN PARA FERTILIDAD, PROSPECCIONES EDAFOLOGICAS, SALINIDA , ETC

1.3.-DEFINICIONES

MUESTRA SIMPLE: CANTIDAD DE PRODUCTO EXTRAIDO DE UNA PARTE CUALQUIERA DE UN SUELO

MUESTRA COMPUESTA: CANTIDAD DE PRODUCTO DE UN SUELO OBTENIDA POR MEZCLA Y HOMOGENEIZACION DE VARIAS MUESTRAS SIMPLES Y CUYAS CARACTERISTICAS SON, CON APROXIMACION SUFICIENTE, LAS DE SUELO

MUESTRA PARA EL LABORATORIO: CADA UNA DE LAS PARTES OBTENIDAS POR REDUCCION DE LA MUESTRA COMPUESTA

1.4.-MATERIAL Y APARATOS

1 .4.1.-PALA O SIMILAR, PARA EXCAVAR UN PEQUEÑO HOYO EN EL SUELO

1. 4.2.-CUCHILLO DEL EDAFOLOGO O PIQUETA

1.4.3.-BOLSAS DE PLASTICO SIN ESTRENAR, PARA SU UTILIZACION COMO ENVASES PORTADORES DE LOS EJEMPLARES DE MUESTRA PARA EL LABORATORIO

1.4.4.-ETIQUETAS (FIG. 1)

1.4.5.-CUERDA O GRAPADORA

1.4.6.-CINTA METRICA

1.4.7.-SONDAS ACANALADAS PARA MUESTRAS SUPERFICIALES (FIG. 2)

1.4.8.-SONDA MODELO AUSTRALIANO (FIG. 3)

1.4. 9.-BOLSAS PORTAPORCIONES. HAN DE SER DE UTILIZACION UNICA, PREFERENTEMENTE DE MATERIAL PLASTICO FLEXIBLE Y DE DIMENSIONES ADECUADAS AL TAMAÑO DE LA PORCION

1.5.-PROCEDIMIENTO

TOMA DE MUESTRAS PARA FERTILIDAD (ANEXO 1)

TOMA DE MUESTRAS PARA PROSPECCIONES EDAFOLOGICAS (ANEXO 2)

TOMA DE MUESTRAS PARA SALINIDAD (ANEXO 3)

1.6.-PREPARACION DE LA MUESTRA PARA EL LABORATORIO

PARA FORMAR UNA MUESTRA COMPUESTA, LAS MUESTRAS SIMPLES SE RECOGEN EN UN PLASTICO Y SE MEZCLAN DE LA SIGUIENTE MANERA: SE COGEN FUERTEMENTE DOS VERTICES OPUESTOS DEL PLASTICO Y SE ESTIRA UNO DE ELLOS DE FORMA QUE EL SUELO RUEDE HACIA EL OTRO. DESPUES SE ESTIRA DE ESTE PARA QUE LA MUESTRA GIRE EN SENTIDO CONTRARIO . SE REPITE EL PROCESO CON LOS OTROS DOS VERTICES. VOLVER A REALIZAR EL PROCESO HASTA CONSEGUIR UNA MEZCLA HOMOGENEA

UNA VEZ HOMOGENEIZADA LA MUESTRA COMPUESTA SE EXTIENDE SOBRE EL PLASTICO FORMANDO UNA CAPA DE 1 CM DE ESPESOR QUE SE DIVIDIRA EN CUATRO CUADRANTES. SE DESCARTAN CUANTITATIVAMENTE DOS DE LOS CUARTOS SITUADOS EN LOS EXTERMOS OPUESTOS DE UNA DIAGONAL. LOS OTROS DOS SE MEZCLAN POR EL PROCEDIMIENTO DESCRITO Y SE VUELVEN A CUARTEAR. EL PROCEDIMIENTO SE REPITE HASTA OBTENER LA CANTIDAD DE MUESTRA COMPUESTA QUE SE DESEE

EL TAMAÑO DE LA MUESTRA COMPUESTA ESTARA EN FUNCION DEL NUMERO DE MUESTRAS PARA EL LABORATORIO NECESARIAS, ASI COMO DE LAS PRUEBAS Y ANALISIS QUE SE PRETENDEN REALIZAR

PREPARADA LA MUESTRA COMPUESTA SE DIVIDIRA ESTA EN EL NUMERO DE PARTES NECESARIAS CONSTITUYENDO CADA UNA DE ELLAS UNA MUESTRA PARA EL LABORATORIO

SI LAS MUESTRAS SIMPLES ESTUVIESEN DEMASIADO HUMEDAS PARA IMPEDIR LA PREPARACION DE LA MUESTRA COMPUESTA POR EL PROCEDIMIENTO INDICADO, SE DESECARAN PREVIAMENTE

1.7.-CERRADO Y ETIQUETADO DE LOS ENVASES DE LAS MUESTRAS

UNA VEZ OBTENIDAS LAS MUESTRAS PARA EL LABORATORIO SE INTRODUCIRAN EN LAS BOLSAS (4.2), ETIQUETANDO CADA MUESTRA (4.4) PARA SU PERFECTA IDENTIFICACION RELLENANDOLAS CON TINTA INDELEBLE AL AGUA (PUEDE SER LA TINTA ORDINARIA DEL BOLIGRAFO A BASE DE GLICERINA). SE CONFECCIONARAN DOS ETIQUETAS IGUALES SEGUN EL MODELO DE LA FIG. 1, INTRODUCIENDO UNA DE ELLAS EN EL INTERIOR DE LA BOLSA, DOBLADA EN DOS PLIEGUES, DE MODO QUE LA CARA ESCRITA QUEDE PROTEGIDA EN EL INTERIOR. SI LA MUESTRA ESTA RELATIVAMENTE SECA NO ES PRECISO TOMAR OTRAS PRECAUCIONES, PERO SI ESTA MUY HUMEDA PUEDE COLOCARSE DENTRO DE UN TROZO DE PLASTICO PARA QUE NO SE MOJE . DE TODOS MODOS DEBE SITUARSE UNA SEGUNDA ETIQUETA EN EL NUDO O CIERRE DE LA BOLSA

EL CIERRE SE PUEDE CONSEGUIR ANUDANDO LA PARTE SUPERIOR DE LA BOLSA CON ALAMBRE PLASTIFICADO UNO DE CUYOS EXTREMOS SE UTILIZA PARA LIGAR FUERA LA 2. ETIQUETA O BIEN GRAPANDO LA BOLSA O ATANDO CON GOMAS O INCLUSO BRAMANTE

1.8.-BIBLIOGRAFIA

1.-GUIA PARA LA DESCRIPCION DE PERFILES DE SUELO. 2. EDICION 1977. FAO. ROMA

2.-QUANTITATIVE AND NUMERICAL METHODS IN SOIL CLASSIFICATION AND SURREY. 1977 R. WEBSTER ED. CLARENDON PRESS. OXFORD

3.-SOIL TAXONOMY 1975. U. S. DEPARTMENT OF AGRICULTURE SOIL CONSERVATION SERVICE AGRICULTURE HANDBOOK N.436

ANEXO A

ANEXO A.-TOMA DE MUESTRAS PARA FERTILIDAD

1.1.-GENERALIDADES

DOS CLASES DE MUESTRAS PUEDEN DIFERENCIARSE EN EL MUESTREO, LAS ALTERADAS, PARA ANALISIS QUIMICO Y MECANICO DEL SUELO Y LAS INALTERADAS PARA LA MEDICION DE PROPIEDADES FISICAS. EN EL PRIMER CASO ES POSIBLE LA FORMACION DE LA SUBMUESTRA O MUESTRA COMPUESTA

LA OPERACION DE TOMA DE MUESTRAS COMPRENDE LAS SIGUIENTES OPERACIONES:FIJACION DEL NUMERO DE MUESTRAS SIMPLES, SELECCION DEL TIPO DE MUESTRA, PROFUNDIDAD DE MUESTREO Y POSIBLE SUBMUESTREO

1. 2.-NUMERO DE MUESTRAS SIMPLES

EL NUMERO DE MUESTRAS SIMPLES A TOMAR DEPENDE DE LA VARIABILIDAD DE LA PROPIEDAD A MEDIR Y DEL GRADO DE EXACTITUD DESEADO. PARA CONOCER ESTA VARIABILIDAD SERIA NECESARIO REALIZAR UN MUESTREO PREVIO PARA ESTIMAR LA VARIANZA DE LA POBLACION DE ACUERDO COMO SE INDICA A CONTINUACION. DE NO DISPONER DE ESTE DATO NO SE PUEDEN DAR VALORES CONCRETOS PARA EL NUMERO DE MUESTRAS SIMPLES SI BIEN LA ESTIMACION SERA TANTO MAS EXACTA CUANTO MAYOR ES EL NUMERO DE LAS MISMAS

EN UN MUESTREO AL AZAR EN EL QUE SE HAYAN EXTRAIDO N UNIDADES, SE OBTIENE ESTIMACIONES DE LA MEDIDA Y VARIANZA V (Y) DE LA MEDIA POR

(FORMULAS OMITIDAS)

EN EL CASO DE NO PODER APLICARSE LOS CALCULOS ANTERIORES DEFINIRAN PREVIAMENTE, DE ACUERDO CON CRITERIOS EDAFOLOGICOS O DE PRACTICA AGRICOLA, AREAS HOMOGENEAS DENTRO DE LA ZONA EN LA QUE SE CULTIVE UNA MISMA VARIEDAD, TOMANDOSE DENTRO DE CADA AREA DEFINIDA HOMOGENEA POR EL SUELO Y EL ESTADO DEL CULTIVO , DE 5 A 25 PORCIONES

1.3-TECNICA DE MUESTREO

DE ACUERDO CON CRITERIOS EDAFOLOGICOS O DE PRACTICA AGRICOLA SE DEFINIRAN PREVIAMENTE AREAS <HOMOGENEAS>

DENTRO DE CADA AREA HOMOGENEA SE DEBE ESTABLECER: TIPO DE MUESTREO Y PROFUNDIDAD DEL MUESTREO

1.3.1.-TIPO DE MUESTREO

EL TIPO DE MUESTREO DEBE CUMPLIR LA PROPIEDAD DE SER AL AZAR, ES DECIR QUE TODAS LAS POSIBLES MUESTRAS SIMPLES QUE SE PUEDAN TOMAR TENGAN LA MISMA PROBABILIDAD DE SER ELEGIDAS

EN EL MUESTREO SIMPLE AL AZAR LA ELECCION DE LOS PUNTOS A MUESTREAR SE REALIZA POR REFERENCIA A UNOS EJES COORDENADOS FIJADOS EN EL AREA. LAS COORDENADAS DE LOS PUNTOS SE OBTIENEN POR TABLAS DE NUMEROS AL AZAR Y COMO UNIDAD PARA CADA EJE RESULTA SUFICIENTE AL CONSIDERAR 1/100 DE SU LONGITUD

EN EL MUESTREO ESTRATIFICADO AL AZAR, LA SUPERFICIE SE SUBDIVIDE EN AREAS DE IGUAL FORMA Y EXTENSION, GENERALMENTE CUADRADOS. DENTRO DE CADA UNO DE ELLOS SE ELIGE AL AZAR UN MISMO NUMERO DE PUNTOS

EN EL CASO DE SER AREAS HOMOGENEAS DE PEQUEÑA EXTENSION O CUANDO NO SE RECURRE A UNO DE LOS DOS MUESTREOS ANTERIORES EL PROCEDIMIENTO CONSISTIRA EN EFECTUAR UN RECORRIDO EN ZIG-ZAG A TRAVES DE LA PARCELA Y TOMAR UNA MUESTRA SIMPLE CADA CIERTO NUMERO DE PASOS, FIJADOS ESTOS DE ACUERDO CON LA EXTENSION DE LA PARCELA Y EL NUMERO DE MUESTRAS SIMPLES A TOMAR

1.3.2.-PROFUNDIDAD DEL MUESTREO

LA PROFUNDIDAD DEL MUESTREO VIENE DETERMINADA POR LA DE ENRAIZAMIENTO. SI LAS RAICES LLEGAN HASTA UNA PROFUNDIDAD GRANDE DEL SUELO SE TOMARAN MUESTRAS SIMPLES A DIFERENTES PROFUNDIDADES SIN MEZCLAR MUESTRAS SIMPLES PARCIALES DE DIFERENTE PROFUNDIDAD. COMO CIFRAS ORIENTATIVAS OFRECEMOS LAS SIGUIENTES :

(TABLA OMITIDA)

LA CANTIDAD DE PORCION DEPENDE DEL MATERIAL USADO PARA EL MUESTREO, SIENDO IMPORTANTE QUE CADA UNIDAD CONTENGA APROXIMADAMENTE LA MISMA CANTIDAD DE SUELO E IGUALMENTE REPARTIDA ENTRE TODO EL INTERVALO QUE CONSTITUYE LA PROFUNDIDAD DEL MUESTREO FIG (4)

ANEXO B

ANEXO B .-TOMA DE MUESTRAS PARA PROSPECCIONES EDAFOLOGICAS

2.1.-GENERALIDADES

LA TOMA DE MUESTRAS DEBE ABARCAR LA TOTALIDAD DEL PERFIL ES DECIR TANTO LOS HORIZONTES PRINCIPALES COMO LOS SUBHORIZONTES Y HORIZONTES DE TRANSICION

ES DE LA MAYOR IMPORTANCIA EL PERFECTO CONOCIMIENTO Y DESCRIPCION DEL PERFIL DEL SUELO PARA LA TOMA DE MUESTRAS POR LO CUAL PREVIAMENTE SE RELLENARA UNA FICHA DESCRIPTIVA DEL PERFIL (VEASE MODELO ADJUNTO)

UNA VEZ ESTUDIADOS Y DESCRITOS EN LA FICHA DE HORIZONTES Y SUBHORIZONTES Y DETERMINADAS ALGUNAS DE SUS PROPIEDADES MEDIANTE ANALISIS DE CARACTERIZACION RAPIDA EN EL CAMPO SE PROCEDERA A LA TOMA DE MUESTRAS

LA MUESTRA DEBE PROCEDER SIEMPRE DE CALICATAS A SER POSIBLE. EN CASO DE OBTENERSE POR SONDEO DEBE INDICARSE

EN LA TOMA DE MUESTRAS HAY QUE TENER EN CUENTA CIERTAS PRECAUCIONES COMO ES EL CASO DE SUELOS QUE CONTIENEN ALTAS PROPORCIONES DE <ELEMENTOS GRUESOS>. ES EL CASO DE MUESTRAS EN TERRENOS SOBRE TERRAZAS FLUVIALES O DERIVADOS DE COLUVIS DE PIE DE MONTE. EN ESTOS CASOS SE HACE NECESARIA UNA SEPARACION DE PARTES GRUESAS EN EL CAMPO POR TAMIZADO DE LA TIERRA FINA QUE SE RECOGE PARA SU POSTERIOR ENVIO AL LABORATORIO; SI BIEN ES PRECISO ANOTAR LA PROPORCION DE ELEMENTOS GRUESOS RECHAZADOS, ASI COMO SU NATURALEZA, TAMAÑO, CARACTERISTICAS LITOLOGICAS Y MINERALOGICAS YA QUE EN CASO CONTRARIO NOS VEREMOS PRIVADOS DE ESTA INFORMACION SOBRE EL MATERIAL MADRE

ESTA SELECCION NO HA DE SER MUY PRECISA PUDIENDO RETIRARSE LOS ELEMENTOS DE CIERTO TAMAÑO, COMO LOS MAYORES DE UN CM, MEDIANTE UNA SIMPLE CRIBA, QUEDANDO PARA EL LABORATORIO LA LABOR DE SEPARACION RESTANTE

JUNTO CON LAS MUESTRAS DEBE ENVIARSE AL LABORATORIO UNA LISTA DE LAS MISMAS QUE COMPRENDAN LOS SIGUIENTES EPIGRAFES:

MUESTRA N. / FECHA / PROFUNDIDAD CM. / HORIZONTE / CLASIFICACION EDAFOLOGICA PREVIA /OBSERVACIONES

2.2.-TECNICA DE MUESTREO

2.2.1.-TECNICA GENERAL

DENTRO DE CADAHORIZONTE REPRESENTATIVO DEL PEDION SE MARCA CON EL CUCHILLO UN RECTANGULO CUYOS LIMITES SUPERIOR E INFERIOR COINCIDEN CON LOS DEL HORIZONTE Y SEGUIDAMENTE SE PROCEDE AL VACIADO HOMOGENEO DE ESTE RECTANGULO EN TODA SU ALTURA HASTA EL PESO DE MUESTRA NECESARIO. EN EL CASO DE QUERER AUMENTAR LA REPRESENTATIVIDAD DEL MUESTREO SE REPETIRA LA OPERACION EN DISTINTOS FRENTES DE LA CALICATA

PARA LOS HORIZONTES MIXTOS O DE TRANSICION ES MUCHO MAS PRECISO TOMAR DOS MUESTRAS INDEPENDIENTES DE LAS AREAS AISLADAS COMO UNO SOLO DE SUS COMPONENTES, Y MEDIANTE EL CALCULO POSTERIOR ATRIBUIRLE UN VALOR PROMEDIO, QUE OBTENER INICIALMENTE UNA MUESTRA MEDIA MEDIANTE LA MEZCLA EN LAS DEBIDAS PROPORCIONES DE DOS MATERIALES DE ORDINARIO CON PROPIEDADES MUY DISTINTAS

ESPECIAL ATENCION HAY QUE PRESTAR AL MUESTREO POR SEPARADO DE: 1) EFLORESCENCIAS SUPERFICIALES, 2) LAS COSTRAS, 3) LOS NODULOS Y CONCRECIONES, 4) LOS LIMITES ABRUPTOS ENTRE HORIZONTES Y 5) LAS <LENGUAS> Y <DIGITACIONES ENTRE HORIZONTES>

CUANDO SE TRATA DE DETERMINADA CIERTOS CONTRASTES BRUSCOS EN LA COMPOSICION, AL PASAR DE UNO A OTRO HORIZONTE, COMO SON LOS CASOS DEL <CAMBIO TEXTURAL ABRUPTO> Y DEL CARACTER <PALEOC>(EN LOS PALEXEVALFS, PALENDALDFS, PALEARGIDS, ETC )EN LAS NORMAS DEL SISTEMA <SOIL TAXONOMY> O CUANDO SE TRATA DE DEFINIR ALGUNOS HORIZONTES DIAGNOSTICOS, CUYAS PROPIEDADES TIENEN QUE ALCANZAR CIERTOS VALORE EN CIERTOS ESPESORES(POR EJEMPLO EL HORIZONTE <ARGILICO> TIENE QUE ALCANZAR SUFICIENTE INCREMENTO EN LA PROPORCION DE ARCILLA , EL 20% MAS QUE LOS ELUVIALES, EN SUS 30 CM SUPERIORES), EN TALES CASOS SERA PRECISO DE ORDINARIO ATENERSE A LAS ESPECIFICACIONES DEL TEMA IMPLICADO PARA PODER REALIZAR EL MUESTREO DE MODO CONVENIENTE . EN GENERAL UNA TOMA DE MUESTRAS CADA 2,5 CM (UNA PULGADA INGLESA ) ES LA NORMA MAS EXIGENTE

2.2.2.-TECNICA SEGUN INTERVALOS FIJOS

ESTE TIPO DE MUESTREO ES RECOMENDABLE CUANDO SE TRATE DE CONOCER LA VARIACION CONTINUADA DE AGUN COMPONENTE, COMO LA ARCILLA, LOS CARBONATOS, A FIN DE ESTUDIAR SU DISTRIBUCION EN EL PERFIL CON DETALLE SUFICIENTE Y SIEMPRE SUPONDRA LA TOMA DE UN NUMERO MUCHO MAYOR DE MUESTRAS QUE EN EL CASO ANTERIOR, Y QUE LOS INTERVALOS DE LOS ESPESORES HAN DE MENORES PUES SI NO ESTOS DATOS CARECERIAN DE SIGNIFICACION

(FIGURA OMITIDA)

ANEXO C

ANEXO C.-TOMA DE MUESTRAS DE SUELOS AFECTADOS POR LA SALINIDAD

3.1.-ESTUDIO DE RECONOCIMIENTO

PARA DELIMITAR UNA ZONA SALINA, SE HACEN TOMA DE MUESTRAS DE PERFILES DEL SUELO, DEL ORDEN DE 1 A 2 POR 100 HECTAREAS, JUNTO CON CUATRO TOMAS DE MUESTRAS DEL HORIZONTE SUPERFICIAL A LA DISTANCIA DE UNOS VEINTE METROS, EN TORNO A CADA CALICATA

LAS MUESTRAS OBTENIDAS DE LOS HORIZONTES DE CADA PERFIL SE ANALIZAN SEPARADAMENTE. LAS CONSEGUIDAS DE LOS HORIZONTES TOMADAS EN TORNO AL PERFIL SE MEZCLAN PARA OBTENER UNA SOLA

3.2.- ESTUDIO DETALLADO

SE OPERA TOMANDO MUESTRAS DE CALICATA DEL SUELO CON UNA INTESIDAD DE TOMAS QUE VARIA CON EL NIVEL DE SALINIDAD ENCONTRADO EN EL ESTUDIO DE RECONOCIMIENTO. COMO NORMA GENERAL PUEDE ESTABLECERSE QUE EL NUMERO DE CALICATAS A ANALIZAR OSCILA ENTRE 5 Y 20 POR CADA 100 HECTAREAS

3.3.-ESTUDIO DE CONTROL

CONOCIDO MEDIANTE EL ESTUDIO DETALLADO, EL NIVEL O LOS NIVELES DE SALINIDAD DE LA ZONA EXAMINADA SE ELIGUEN PUNTOS DE CONTROL, ESTRATEGICAMENTE Y EN NUMERO DEPENDIENTE DA CADA CASO PARTICULAR. EN CADA PUNTO DE CONTROL SE ESTABLECE UN CUADRO DE 6 X 6 METROS EN LOS QUE PERIODICAMENTE SE EFECTUARAN TOMAS DE MUESTRAS. CON CARACTER ORIENTATIVO SE CITAN LAS SIGUIENTES:

3. 3.1.-A LA PROFUNDIDAD DE 0-25 CMS, 9TOMAS QUE SE MEZCLAN PARA OBTENER UNA

3.2.1.- A LA PROFUNDIDAD DE 20-50CMS, 5 TOMAS QUE SE MEZCLAN PARA OBTENER UNA

3.3.3.-A LA PROFUNDIDAD 50-100 CMS, 5 TOMAS QUE SE MEZCLAN PARA OBTENER UNA

EN EL CASO DE QUE HAYA EFLORESCENCIA SALINAS SE MUESTREAN POR SEPARADO Y SE RETIRAN ATES DE PROCEDER A LA TOMA DE MUESTRAS DESCRITA ANTERIORMENTE

SI SE TIENE EN CUANTA LA DISTRIBUCION DE LAS COMUNIDADES VEGETALES HALOFILAS EN LA ELECCION DE LOS PUNTOS DE MUESTREO SE AUMENTARA CONSIDERABLEMENTE LA REPRESENTATIVIDAD DE ESTE, ASI COMO SI SE TIENEN EN CUENTA LOS CRITERIOS EXPRESADOS EN 1.1

(FIGURAS OMITIDAS)

ANÁLISIS

  • Rango: Orden
  • Fecha de disposición: 17/09/1981
  • Fecha de publicación: 14/10/1981
  • Entrada en vigor: a los 30 Dias a partir del 14 de octubre de 1981.
Referencias posteriores

Criterio de ordenación:

  • SE DEROGA lo indicado , por Real Decreto 971/2014, de 21 de noviembre (Ref. BOE-A-2014-12561).
  • SE DICTA EN RELACION:
    • aprobando Metodos oficiales de Analisis de Leche y productos Lacteos: Real Decreto 1533/1991, de 18 de octubre (Ref. BOE-A-1991-26241).
    • aprobando Métodos de Análisis de productos Orgánicos Fertilizantes: Real Decreto 1110/1991, de 12 de julio (Ref. BOE-A-1991-18408).
  • SE DEROGA:
    • determinados métodos de análisis, por Orden de 18 de julio de 1989 (Ref. BOE-A-1989-17510).
    • determinados Métodos de Análisis, por Orden de 23 de mayo de 1989 (Ref. BOE-A-1989-12209).
    • determinados métodos de análisis, por Orden de 26 de enero de 1989 (Ref. BOE-A-1989-2695).
    • lo indicado del anexo II, por Orden de 1 de julio de 1987 (Ref. BOE-A-1987-15871).
Referencias anteriores
Materias
  • Abonos
  • Aceites vegetales
  • Agricultura
  • Aguas
  • Alcoholes
  • Análisis
  • Carnes
  • Grasas
  • Leche
  • Piensos
  • Plantas
  • Productos fitosanitarios
  • Productos lácteos
  • Vinagres
  • Vinos

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